為什么科學(xué)家需要擴(kuò)增細(xì)菌DNA用于分子鑒定和食源性病原體的血清分型?識(shí)別微生物在許多行業(yè)中都非常重要，并且通常被視為質(zhì)量保證，以確保所生產(chǎn)的食品或使用的成分不含有食源性細(xì)菌。許多州和國家還要求對(duì)特定物種進(jìn)行檢測(cè)，例如沙門氏菌，李斯特菌和大腸桿菌。

病原體概覽圖像

傳統(tǒng)上，識(shí)別微生物的方法使用差異培養(yǎng)基。這些是需要孵化的固態(tài)培養(yǎng)基，有時(shí)需要孵育，有時(shí)需要長達(dá)48小時(shí)。這可能導(dǎo)致識(shí)別食物樣品中可能存在的微生物的嚴(yán)重延遲。使用分子技術(shù)，尤其是基于擴(kuò)增的方法，如終點(diǎn)PCR或qPCR，可以提供更快的結(jié)果，從而可以在數(shù)小時(shí)而不是數(shù)天內(nèi)做出決策。

使用基于擴(kuò)增的技術(shù)(qPCR，WGS)的血清分型也提供了區(qū)分特定病原體的亞種的能力。例如，可以使用分子方法區(qū)分超過2500種沙門氏菌亞型，提供比傳統(tǒng)技術(shù)更多的信息。

Promega公司麥克斯韋是怎樣® RSC病原套件用于凈化細(xì)菌的DNA?這與其他技術(shù)有何不同?

Maxwell RSC PureFood病原體試劑盒與我們的Maxwell RSC儀器配合使用。這些自動(dòng)化核酸提取系統(tǒng)使用纖維素磁性顆粒結(jié)合粗制樣品裂解物中的DNA，然后通過一系列洗滌步驟，在洗脫純化的DNA以備下游擴(kuò)增之前，去除任何不需要的抑制劑或材料。

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Maxwell RSC儀器是基于盒式磁帶的系統(tǒng)。純化所需的所有試劑均以易于使用的盒式磁帶提供?？蛻糁恍鑼悠诽砑拥侥兄校瑢⑵浞湃雰x器中，然后運(yùn)行協(xié)議。系統(tǒng)自動(dòng)執(zhí)行提取，這是與其他技術(shù)的主要區(qū)別。通過去除與旋轉(zhuǎn)柱和其他方法相關(guān)的手動(dòng)清洗步驟和移液，自動(dòng)化消除了由于人為錯(cuò)誤導(dǎo)致的大部分可變性。

Maxwell RSC PureFood病原體提取方案補(bǔ)充了基于擴(kuò)增的測(cè)試，例如qPCR或NGS，它們需要高質(zhì)量的純化DNA。

Maxwell RSC Purefood Pathogen Kit為研究人員帶來了哪些優(yōu)勢(shì)?這種病原體試劑盒如何工作?

該技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)之一是它允許研究人員在一個(gè)步驟中溶解革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細(xì)菌。許多其他試劑盒利用酶來消化細(xì)胞壁并幫助打破革蘭氏陽性細(xì)菌。Maxwell RSC Purefood病原體試劑盒中使用的裂解緩沖液化學(xué)溶解這些鍵，使用一步從兩種細(xì)胞類型中釋放DNA。

實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化的使用消除了可變性，消除了與手動(dòng)技術(shù)相關(guān)的不一致性。在提取和重復(fù)中確保一致性。

最重要的是，通過自動(dòng)化DNA純化和確保運(yùn)行之間的一致性，Maxwell系統(tǒng)可以讓科學(xué)家們做其他事情，例如準(zhǔn)備樣品或進(jìn)行下游分析，從而提高工作流程的效率。

Maxwell Purefood病原體試劑盒比其他病原體試劑盒有哪些優(yōu)勢(shì)?

使用差異培養(yǎng)基，進(jìn)行“富集步驟”，其中將可疑食物材料放置在Stomacher內(nèi)以允許存在的任何細(xì)菌生長。然后將樣品置于培養(yǎng)箱中的差異培養(yǎng)基上。此過程需要兩天時(shí)間才能完成。

使用Maxwell系統(tǒng)，仍然進(jìn)行過夜孵育富集步驟，但隨后的DNA提取是自動(dòng)化的，并且可以在8小時(shí)輪班中完成多次運(yùn)行。Maxwell RSC儀器可以處理16個(gè)樣品，Maxwell RSC 48可以在大約一個(gè)小時(shí)內(nèi)處理48個(gè)樣品。

下游qPCR分析可能需要半小時(shí)到45分鐘。這種自動(dòng)化允許研究人員在兩到三個(gè)小時(shí)內(nèi)處理16到48個(gè)樣本，包括下游qPCR，而不是手動(dòng)方法所需的兩天。

實(shí)驗(yàn)室采用更快速的檢測(cè)方法，以更快的時(shí)間框架提供可操作的信息，這一點(diǎn)至關(guān)重要。如果擔(dān)心被污染的原材料或食品會(huì)被生產(chǎn)出來，結(jié)果可能會(huì)迅速返回制造商或?qū)嶒?yàn)室，以便能夠以最小的延遲做出決定。

可以麥克斯韋® RSC Purefood病原體的試劑盒可以用任何其他產(chǎn)品用于自動(dòng)化病原體提取和識(shí)別的過程?

我們還提供一個(gè)名為MaxPrep的系統(tǒng)，該系統(tǒng)可與Maxwell RSC系統(tǒng)一起用于自動(dòng)化樣品制備，標(biāo)準(zhǔn)化和qPCR設(shè)置。MaxPrep是一個(gè)液體處理程序，具有允許研究人員進(jìn)行qPCR設(shè)置的特定協(xié)議。

MaxPrep配有預(yù)設(shè)協(xié)議，因此用戶不需要編程不同的步驟。在DNA提取的上游側(cè)，MaxPrep可以進(jìn)行樣品制備和設(shè)置。Maxwell RSC或RSC 48的甲板托盤放置在MaxPrep內(nèi)部，允許整合提取前和提取后的步驟，包括將洗脫緩沖液和樣品分配到RSC柱中。

在提取之前和之后使用MaxPrep消除了手動(dòng)處理的許多難點(diǎn)，并且旨在自動(dòng)化整個(gè)工作流程。

已經(jīng)提取的任何DNA洗脫液都可以在qPCR或終點(diǎn)PCR的下游使用。如果需要，研究人員還可以使用qPCR或吸光度檢測(cè)或定量分析物。

除了專業(yè)知識(shí)，提取方案和儀器，Promega還提供qPCR所需的許多緩沖液和酶。

Promega在使用該病原體試劑盒和儀器時(shí)能提供哪些保證?

我們所有的試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的QA標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試。所有產(chǎn)品都附有分析證書，其中包含所有質(zhì)量測(cè)試的詳細(xì)信息。

作為一名產(chǎn)品經(jīng)理，我生活在反饋中，無論好壞，不僅要改進(jìn)和發(fā)展我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，還要填補(bǔ)我們目前沒有提供的產(chǎn)品的空白。

對(duì)于病原體試劑盒，我們?cè)缙谂c行業(yè)中的主要意見領(lǐng)袖密切合作，與他們一起了解他們所面臨的挑戰(zhàn)。他們給了我們一些非常直接的反饋，我們能夠在開發(fā)過程中將其納入我們的產(chǎn)品需求中。最終產(chǎn)品是與業(yè)界合作的高潮。

您能簡單介紹一下Promega，您的工作以及您所服務(wù)的行業(yè)嗎?

Promega產(chǎn)品被生命科學(xué)家使用，他們正在詢問有關(guān)生物過程的基本問題，以及應(yīng)用科學(xué)知識(shí)診斷和治療疾病，檢測(cè)工業(yè)和食品制造過程中的微生物污染，發(fā)現(xiàn)新療法，以及使用遺傳學(xué)和DNA的科學(xué)家測(cè)試人體識(shí)別。

Promega最初于1978年在美國威斯康星州麥迪遜市成立，在16個(gè)國家設(shè)有分支機(jī)構(gòu)，在全球100多個(gè)國家設(shè)有分銷商。