目錄

第一章緒論……………………………………………………………………………一１

１．１膠原蛋白概況…………………………………………………………………．１

１．１．１膠原蛋白的結(jié)構(gòu)…………………………………………………………１

１．１．２膠原蛋白的分布及來源…………………………………………………１

１．１．３膠原蛋白的提取方法及多肽的制備……………………………………２

１．２膠原蛋白的應(yīng)用與研究現(xiàn)狀…………………………………………………．２

１．２．１膠原蛋白在食品、醫(yī)藥中的應(yīng)用………………………………………２

１．２．２膠原蛋白在美容和品中的應(yīng)用……………………………………３

１．２．３膠原蛋白的研究現(xiàn)狀……………………………………………………４

１－３本論文的選題意義及主要研究內(nèi)容…………………………………………．６

第二章羅非魚皮酶法脫脂工藝條件的優(yōu)化…………………………………………．．７

２．１材料與試劑……………………………………………………………………．７

２．２儀器與設(shè)備……………………………………………………………………．７

２．３實驗方法及內(nèi)容………………………………………………………………．７

２．３．１羅非魚皮基本成分的測定………………………………………………７

２．３．２羅非魚皮中膠原蛋白含量的測定………………………………………７

２．３．３魚皮膠原蛋白的提取工藝流程…………………………………………８

２．３．４羅非魚皮脫脂率的測定…………………………………………………９

２．３．５羅非魚皮酶法脫脂單因素實驗…………………………………………９

２．３．６羅非魚皮酶法脫脂工藝條件的響應(yīng)面優(yōu)化…………………………．１０

２．３．７脫脂羅非魚皮膠原蛋白提取率的測定………………………………．１０

２．４實驗結(jié)果及分析………………………………………………………………１０

２．４．１羅非魚皮基本成分……………………………………………………１０

２．４．２羅非魚皮酶法脫脂單因素實驗…………………………………………１１

２．４．３羅非魚皮酶法脫脂工藝條件的響應(yīng)面優(yōu)化…………………………．１３

２．４．４脫脂羅非魚皮膠原蛋白提取率………………………………………．１７

２．５本章小結(jié)………………………………………………………………………１７

第三章羅非魚皮膠原蛋白的理化性質(zhì)研究…………………………………………１９

３．１材料與試劑……………………………………………………………………１９

３．２儀器與設(shè)備……………………………………………………………………１９

３．３實驗方法及內(nèi)容………………………………………………………………１９

萬方數(shù)據(jù)

３．３．１羅非魚皮膠原蛋白的氨基酸組成……………………………………１９

３．３．２膠原蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳……………………………………．１９

３．３．３膠原蛋白的紫外光譜掃描……………………………………………２０

３．３．４膠原蛋白熱變性溫度（Ｔｄ）的測定……………………………………一２０

３．３．５膠原蛋白的溶解性實驗………………………………………………．２０

３．４實驗結(jié)果及分析………………………………………………………………２１

３．４．１羅非魚皮膠原蛋白的氨基酸組成……………………………………．２１

３．４．２膠原蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳……………………………………．２１

３．４．３膠原蛋白的紫外光譜掃描……………………………………………．２２

３．４．４膠原蛋白熱變性溫度（Ｔｄ）的測定……………………………………一２３

３．４．５膠原蛋白的溶解性實驗………………………………………………．２４

３．５本章小結(jié)………………………………………………………………………２５

第四章羅非魚皮膠原蛋白多肽的制備及性質(zhì)………………………………………２６

４．１材料與試劑……………………………………………………………………２６

４．２儀器與設(shè)備……………………………………………………………………２６

４－３實驗方法及內(nèi)容………………………………………………………………２６

４．３．１梯級多肽的制備………………………………………………………．２６

４．３．２魚皮膠原多肽水分含量測定…………………………………………．２７

４．３．３魚皮膠原多肽灰分含量測定…………………………………………．２７

４．３．４魚皮膠原多肽總蛋白含量測定………………………………………．２７

４．３．５魚皮膠原蛋白多肽純度測定…………………………………………．２７

４．３．６魚皮膠原多肽平均分子量分布的測定………………………………．２７

４．４實驗結(jié)果及分析………………………………………………………………２８

４．４．１膠原蛋白多肽水分含量………………………………………………．２８

４．４．２膠原蛋白多肽灰分含量………………………………………………．２８

４．４．３膠原蛋白多肽總蛋白含量……………………………………………．２９

４．４．４膠原蛋白多肽的純度…………………………………………………．２９

４．４．５多肽平均分子量分布…………………………………………………．２９

４．５本章小結(jié)………………………………………………………………………３０

第五章羅非魚皮膠原蛋白及多肽對小鼠皮膚的護(hù)膚功效…………………………３ｌ

５．１材料與試劑……………………………………………………………………３１

５．２儀器與設(shè)備……………………………………………………………………３ｌ

５－３實驗方法及內(nèi)容………………………………………………………………３１

５．３．１膠原蛋白及多肽涂抹實驗……………………………………………．３１

ＶＩＩ

萬方數(shù)據(jù)

５．３．２鼠皮的制備……………………………………………………………．３２

５．３－３小鼠皮膚角質(zhì)層含水量的測定………………………………………．３２

５．３．４小鼠皮膚白度的測定…………………………………………………．３３

５．３．５小鼠皮膚組織形態(tài)的觀察和成肌纖維細(xì)胞計數(shù)……………………．３３

５．４實驗結(jié)果及分析………………………………………………………………３７

５．４．１膠原蛋白及多肽對小鼠皮膚角質(zhì)層水含量的影響…………………．３７

５．４．２膠原蛋白及多肽使用對小鼠皮膚白度的影響………………………．３９

５．４．３膠原蛋白及多肽對小鼠皮膚形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響………………………．４１

５．５本章小結(jié)………………………………………………………………………４４

第六章結(jié)論與展望……………………………………………………………………４５

６．１結(jié)｛侖……………………………………………………………………………………………………．４５

６．２展望……………………………………………………………………………４５

參考文獻(xiàn)………………………………………………………………………………４７

攻讀學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動及成果清單………………………………………………５２

ＶⅡＩ

萬方數(shù)據(jù)

插圖清單

圖２．１溫度對羅非魚皮脫脂率的影響……………………………．．１１

圖２．２ｐＨ對羅非魚皮脫脂率的影響…………………．……．．……１２

圖２．３加酶量對羅非魚皮脫脂率的影響……………………………１２

圖２．４脫脂時間對羅非魚皮脫脂率的影響…………………………．１３

圖２．５脫脂時間與脫脂溫度對脫脂率的影響………………………．．１６

圖２．６脫脂溫度與加酶量對脫脂率的影響…………………………．１６

圖２．７脫脂時間與加酶量對脫脂率的影響…………………………．１６

圖３．１羅非皮膠原蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳譜圖………………………．２２

圖３．２羅非魚皮膠原蛋白紫外吸收光譜……………………………２３

圖３．３羅非魚皮膠原蛋白熱變性曲線……………………………．．２４

圖３．４羅非魚皮膠原蛋白溶解度曲線……………………………．．２４

圖５．１涂抹液液處理后鼠皮膚角質(zhì)層紅外掃描圖……………………．３８

圖５．２小鼠皮膚組織切片………………………………………４３

ＩＸ

萬方數(shù)據(jù)

表格清單

表２．１Ｂｏｘ－Ｂｅｎｈｎｋｅｎ中心組合實驗因素水平編碼表…………………．１０

表２．２羅非魚魚皮基本化學(xué)組成（以濕基計）………………………１０

表２．３響應(yīng)面分析實驗結(jié)果……………………………………．１４

表２．４方差分析表…………………………………………．．．１４

表３．１羅非魚皮膠原蛋白氨基酸組成……………………………．．２１

表４．１膠原蛋白多肽水分含量…………………………………．．２８

表４．２膠原蛋白多肽灰分含量…………………………………．．２８

表４．３膠原蛋白多肽的總蛋白含量………………………………．２９

表４．４膠原蛋白多肽純度…．．…．．……………．………．………２９

表４．５膠原蛋白多肽平均分子量分布……………………．………．３０

表５．１鼠皮組織梯級脫水流程…………………………………．．３４

表５．２鼠皮組織透明化流程……………………………………．３５

表５．３鼠皮組織浸蠟時間……………………．………．………．３５

表５．４蘇木紫染流程………………………………………．．３６

表５．５伊紅染流程…………．………………………………３６

表５．６鼠皮組織切片透明化流程表………………………………．３７

表５．７小鼠皮膚角質(zhì)層吸光度之比………………………………．３９

表５．８小鼠涂抹不同配方溶液皮膚顏量值………………………．．４０

表５．９小鼠皮膚切片組織形態(tài)特征………………………………．４ｌ

Ｘ

萬方數(shù)據(jù)

第一章緒論

第一章緒論

本章主要從膠原蛋白的結(jié)構(gòu)、分布及來源、提取及制備方法三個方面介

紹膠原蛋白的基本知識，在充分了解膠原蛋白的研究以及應(yīng)用現(xiàn)狀后，確立

本篇論文立題依據(jù)及實驗方法。

１．１膠原蛋白概況

１．１．１膠原蛋白的結(jié)構(gòu)

膠原蛋白（也稱膠原，ｃｏｌｌａｇｅｎ），是一種細(xì)胞外的不溶性蛋白質(zhì)，常以

纖維形式存在于動物體組織中。原膠原是膠原蛋白的基本結(jié)構(gòu)單元，是一種

由三條多肽鏈扭曲旋轉(zhuǎn)形成的螺旋結(jié)構(gòu)【ｌ】。膠原蛋白種類較多，目前已被發(fā)

現(xiàn)的膠原蛋白有１９種，膠原樣蛋白１０種以上。膠原蛋白肽鏈?zhǔn)怯砂被釟?/p>

基之間通過形成肽鍵鍵合而成。螺旋盤繞的肽鏈結(jié)構(gòu)中，每條肽鏈本身又具

有特殊的左手螺旋結(jié)構(gòu)ｆ２】。膠原蛋白中富含甘氨酸和脯氨酸，甘氨酸含量達(dá)

到總氨基酸殘基的３３％，脯氨酸則接近２５％１３１，因此甘氨酸和脯氨酸被當(dāng)作

膠原蛋白的特征氨基酸。膠原蛋白中酪氨酸殘基含量很少，并且?guī)缀醪缓?/p>

氨酸和半胱氨酸。膠原分子包含的三條肽鏈，具有約１０００個氨基酸殘基，

每條肽鏈相對分子質(zhì)量在１００千道爾頓左右，所以膠原分子的相對分子質(zhì)量

約３００干道爾頓【４Ｊ。

１．１．２膠原蛋白的分布及來源

膠原蛋白在生物體中含量多、分布廣，從水母、海綿等簡單多細(xì)胞生物

到線蟲、蚯蚓等低等脊椎動物，再到高等的哺動物機(jī)體組織中，都含有一

定量的膠原蛋白［５１。膠原是細(xì)胞外基質(zhì)主要組分之一，是哺動物體內(nèi)含量

最多的一類蛋白質(zhì)。膠原蛋白主要分布在生物體的骨骼，牙齒，皮膚，韌帶

和結(jié)締組織、內(nèi)臟間質(zhì)等部位中，并使相應(yīng)組織具有特定的機(jī)械強(qiáng)度以支撐

器官、保護(hù)機(jī)體［１１。陸生哺動物豬、牛、羊等的皮膚、骨骼中含有大量的

膠原蛋白，是目前工業(yè)生產(chǎn)膠原蛋白的主要來源。但近年來由于陸生動物源

傳染病、宗教忌諱以及豬、牛、羊類產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)節(jié)產(chǎn)生的碳排放比雞、魚產(chǎn)

品高出５０％，出于減少碳排放等環(huán)境保護(hù)要求【６】，以及水產(chǎn)生物加工副產(chǎn)品

中如魚皮、魚鱗、魚眼、魚鰭、烏賊類的皮和頭蓋軟骨、章魚皮、鮑的肌肉

和外套膜等中膠原蛋白含量相對豐富，因此成為膠原蛋白新的提取來源ＨＪ。

膠原蛋白最常見的分類方式是根據(jù)是否具有周期性橫紋膠原原纖維，將

膠原蛋白分為原纖膠原蛋白和非原纖膠原蛋白【８］。原纖膠原蛋白包括Ｉ、ＩＩ、

萬方數(shù)據(jù)