自動(dòng)化測(cè)定化學(xué)介導(dǎo)的細(xì)胞毒性機(jī)制

基于體外細(xì)胞的測(cè)定是評(píng)估測(cè)試化合物毒性的合適且經(jīng)濟(jì)的方法，特別是在藥物發(fā)現(xiàn)研究計(jì)劃中。通常的工作流程包括測(cè)試化合物滴定，應(yīng)用于細(xì)胞和孵育數(shù)天。所有的細(xì)胞毒性測(cè)定特異性液體處理任務(wù)是通過使用CyBio進(jìn)行® FELIX(耶拿)儀器作為一個(gè)獨(dú)立的，完全自動(dòng)化的系統(tǒng)。

通過使用開發(fā)用于定量感興趣的生物標(biāo)志物的試劑來評(píng)估測(cè)試化合物的效果。簡(jiǎn)而言之，產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用的化合物或治療通過引起顯著的形態(tài)變化，負(fù)面影響復(fù)制速率或?qū)е驴尚屑?xì)胞計(jì)數(shù)減少而這樣做。從體外方法獲得的信息是識(shí)別潛在毒性問題的重要前體。在機(jī)械細(xì)胞毒性分析中，使用獨(dú)特的生物標(biāo)志物來報(bào)告細(xì)胞的健康狀況。在本文中，使用一組三個(gè)測(cè)定來評(píng)估與細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞凋亡和膜完整性(細(xì)胞毒性)的變化相關(guān)的生物標(biāo)志物。

當(dāng)組合使用時(shí)，這些生物標(biāo)志物可以幫助區(qū)分凋亡，壞死或生長(zhǎng)停滯的細(xì)胞群。表1描述了用于該研究的測(cè)定。

所述CellTox ™綠色測(cè)定法與胱天蛋白酶-GLO多路復(fù)用® 3/7測(cè)定或的CellTiter-GLO ® 2.0，以減少樣品處理和保存細(xì)胞樣品。胱天蛋白酶格洛的檢測(cè)化學(xué)® 3/7和的CellTiter-GLO ®2.0是不兼容的。因此，組裝一式兩份樣品以分別評(píng)估細(xì)胞凋亡和細(xì)胞活力。對(duì)于這種分析工作流程，與連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞相比，冷凍，解凍和使用細(xì)胞提供了合適的選擇。解凍并使用這些解凍和使用的細(xì)胞，并在解凍后直接接種，不需要任何先前的細(xì)胞培養(yǎng)活性。融合和傳代數(shù)可以影響培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)性能，使用解凍和使用細(xì)胞可以克服這些挑戰(zhàn)。

通過將實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化用于所有實(shí)驗(yàn)步驟，使得分析工作流程更有效。本文介紹了自動(dòng)連續(xù)滴定和將測(cè)試化合物應(yīng)用于測(cè)定板，以及添加試劑和細(xì)胞。結(jié)合自動(dòng)化保證了可靠的實(shí)驗(yàn)設(shè)置，避免了用戶對(duì)用戶移液的可變性并提高了實(shí)驗(yàn)室效率。

對(duì)于這種應(yīng)用，冷凍即時(shí)的HepG2細(xì)胞(細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù))，人肝細(xì)胞系，GloMax ®用于檢測(cè)熒光和發(fā)光測(cè)定信號(hào)的查詢多模檢測(cè)系統(tǒng)(Promega)，和一個(gè)CyBio ®菲利克斯儀器為所有液體處理步驟已經(jīng)受雇了。為了采用這種自動(dòng)化分析過程，用于實(shí)驗(yàn)步驟的最短時(shí)間和注意力就足夠了。自動(dòng)化過程允許在384孔微孔板格式中一式四份地測(cè)試多達(dá)八種化合物。當(dāng)優(yōu)選時(shí)間過程研究時(shí)，可以組裝復(fù)制的板。

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