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        從細(xì)菌細(xì)胞中分離質(zhì)粒DNA的自動化

        從細(xì)菌中分離質(zhì)粒DNA是一種重要的分子生物學(xué)方法,用于產(chǎn)生用于優(yōu)選下游反應(yīng)的模板DNA。質(zhì)粒分離方法是基本的; 然而,高通量質(zhì)粒DNA提取一直具有挑戰(zhàn)性,存在諸如低產(chǎn)量和基因組DNA(gDNA)污染的問題。

        從細(xì)菌細(xì)胞中分離質(zhì)粒DNA的自動化

        一種自動化,高通量,基于多孔的質(zhì)粒提取技術(shù),其產(chǎn)量適合下游應(yīng)用且不含gDNA,將大大有利于高通量實(shí)驗(yàn)室,其中質(zhì)粒提取經(jīng)常成為瓶頸。

        96孔二氧化硅過濾板質(zhì)粒提取試劑盒可在市場上買到。在這些方法中,收獲細(xì)菌細(xì)胞并通過堿裂解裂解,消除細(xì)胞碎片,然后通過結(jié)合二氧化硅膜收集提取的DNA。隨后在洗脫純化的DNA之前洗滌膜。

        在本文中,耶拿描述了在SynbiCITE倫敦DNA鑄造開發(fā)出一種技術(shù),它使用CyBio ® FELIX移液平臺自動96孔,二氧化硅過濾板基于質(zhì)粒DNA提取協(xié)議。

        使用的CyBio ® FELIX移液平臺(圖1)使96個(gè)樣品,以在同一時(shí)間進(jìn)行處理,在約1.5小時(shí),用通用性同時(shí)處理大量的板。緊湊的平臺最大限度地減少了實(shí)驗(yàn)室中自動質(zhì)粒分離系統(tǒng)所需的工作臺空間,并且與臺式離心機(jī)和機(jī)械臂一起,可以實(shí)現(xiàn)完全自動化的質(zhì)粒提取系統(tǒng)。使用該技術(shù),從細(xì)菌培養(yǎng)物中分離出平均產(chǎn)量為65ng /μL的質(zhì)粒DNA,樣品之間的變異性較低(±7.7ng /μLSD)和50μL的洗脫體積。質(zhì)粒DNA樣品也具有高質(zhì)量,適用于下游應(yīng)用,如轉(zhuǎn)化或測序。

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