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        訣竅減少DNA堿基編輯的錯誤
        
			
        
				2019-03-06 09:58:35
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        基因科學研究所(IBS，韓國)基因組工程中心的研究人員已經(jīng)確定了基于CRISPR的稱為腺嘌呤堿基編輯器的DNA編輯工具的錯誤率。評估這些創(chuàng)新技術的全基因組靶標特異性對于利用其在臨床和生物技術中的應用至關重要。該研究結果發(fā)表在Nature Biotechnology上。
        

        訣竅減少DNA堿基編輯的錯誤
        

        DNA的四個堿基是我們細胞使用的字母：腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)配對，胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)配對，形成32億個字母的獨特組合。由于一些遺傳性疾病是由一個字母的突變引起的，因此一種強大的基因工程工具CRISPR的一些應用處理了這種單字母差異的糾正?？梢蕴砑拥紺RISPR系統(tǒng)以促進字母轉換的蛋白質(zhì)的實例是用于C-to-T轉換的胞??嘧啶堿基編輯器(CBE)和用于A-to-G變化的腺嘌呤堿基編輯器(ABE)。迄今為止，IBS團隊一直對研究ABE特異性感興趣。
        

        由Jin-Soo Kim領導的研究小組研究了人類細胞中最近開發(fā)的ABE蛋白ABE7.10 的錯誤率。他們確定了受ABE7.10影響的人類基因組位置，并掃描了超出目標的錯誤。為此，他們使用了改良版Digenome-seq，這是一種由同一研究中心開發(fā)的測序技術，該技術已經(jīng)成功確定了CBE，CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1等的準確性。
        

        他們用對應于7個DNA靶標的7個指導RNA測試ABE7.10，并將結果與??常見的CBE和Cas9核酸酶進行比較。修改后的Digenome-seq在整個人類基因組中檢測到平均60個脫靶錯誤。有趣的是，盡管這三種蛋白質(zhì)被設計成針對同一個位點，但它們識別出不同的脫靶點。
        

        IBS生物學家還展示了一些策略來抑制脫靶修改的數(shù)量。在指南RNA末尾添加幾個Gs減少了脫靶錯誤，以及使用不同類型的Cas9(由2018年由同一團隊開發(fā)的Sniper-Cas9)和ABE7.10的交付。通過預裝配的核糖核蛋白，而不是通過質(zhì)粒。
        

        該團隊旨在為ABE的發(fā)展做出貢獻，以更精確和有效的方式引入所需的單字母變更。“隨著基礎編輯器的準確性得到證實，我們預計它將在未來的醫(yī)療和農(nóng)業(yè)領域得到廣泛應用，”Jin-Soo Kim說。
        
			

			
          
        
			
        
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