角膜疾?。赫先毕菪涂笻SV-1大范圍核酸酶向人角膜的基因轉(zhuǎn)移
角膜移植排斥是慢性潛伏性角膜炎(HK)潛在感染患者的主要問題。迫切需要針對(duì)潛伏和活動(dòng)形式的單純皰疹病毒1型(HSV-1)的新型抗病毒藥。
大范圍核酸酶是能夠誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂的序列特異性歸巢內(nèi)切核酸酶。概念驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,量身定制的大范圍核酸酶在體外可有效抵抗HSV-1。
研究人員將假設(shè)使用大范圍核酸酶編碼載體對(duì)眼庫中的人類角膜進(jìn)行預(yù)處理將使皰疹性角膜炎患者接受藥物治療的角膜然而,該策略需要有效地將基因遞送至人角膜內(nèi)皮。
使用重組腺相關(guān)病毒,血清型2/1(rAAV2 // 1),在人角膜離體中證明了報(bào)告基因的有效基因傳遞。
最佳病毒劑量為3.7×1011 VG,暴露時(shí)間為1天,然后在溶脹培養(yǎng)基中孵育6天。此外,孵育12天可導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因表達(dá)超過70%。
使用相似的轉(zhuǎn)導(dǎo)條件,培養(yǎng)2周后,在39.4%的內(nèi)皮細(xì)胞中檢測(cè)到大范圍核酸酶轉(zhuǎn)基因表達(dá)。
結(jié)果表明,感染了HSV-1的角膜培養(yǎng)基和內(nèi)皮細(xì)胞的總病毒載量減少。
這項(xiàng)工作提供了有關(guān)將遺傳物質(zhì)輸送到角膜的最佳條件的信息,并且首次證明了這一點(diǎn)。
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