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        四君子湯對(duì)脾虛大鼠空腸黏膜損傷的修復(fù)作用及機(jī)制

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        2022年4月21日發(fā)(作者:浮小麥)

        Chinese Journal?。铮妗。郑澹簦澹颍椋睿幔颍。停澹洌椋悖椋睿濉≈袊?guó)獸醫(yī)雜志2012年(第48卷)第5期?。担贰?/p>

        四君子湯對(duì)脾虛大鼠空腸黏膜損傷的修復(fù)作用及機(jī)制 

        劉發(fā)強(qiáng) ,何玉英 ,李杰峰 ,張挪威 ,昝軍蘭。,劉鳳華。,許劍琴 

        (1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室,北京海淀100193;2北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技系,北京昌平102206) 

        摘要:通過(guò)檢測(cè)脾虛大鼠空腸中PCNA和IGF-1的表達(dá),探討四君子湯對(duì)脾虛大鼠空腸黏膜修復(fù)的影響。試驗(yàn)分對(duì)照 

        組、脾虛組、四君子顆粒治療組和治療對(duì)照組,每組采取空腸中段作樣本;H.E.染法觀察空腸組織結(jié)構(gòu),免疫組織化學(xué)法檢 

        測(cè)PCNA和IGF-1的表達(dá)。脾虛組大鼠空腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度極顯著降低(P<O.01);四君子顆粒治療組大鼠絨毛長(zhǎng)度、隱 

        窩深度的顯著高于治療對(duì)照組(P<O.05)。脾虛組大鼠空腸中PCNA、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)極顯著增加(P%0.01);四君子顆?!?/p>

        治療組PCNA、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)顯著高于治療對(duì)照組(P<O.05)。結(jié)果表明,四君子湯可以促進(jìn)脾虛模型大鼠空腸的修復(fù) 

        過(guò)程。 

        關(guān)鍵詞:胰島素樣生長(zhǎng)因子一1;PCNA;空腸;脾虛 

        中圖分類號(hào):¥853.91;¥865.1?。病∥墨I(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0529—6005(2012)05—0057—03 

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        LIU?。疲幔瘢椋幔睿纭。龋拧。伲酰椋睿纭。蹋伞。剩椋澹妫澹睿纭。冢龋粒危恰。危酰铮鳎澹椤?,ZAI Jun-lan ,UU Feng-hua2,XU Jian-qin 

        (1.China?。粒幔纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔臁。眨睿椋觯澹颍螅椋簦?,Beijing?。保埃埃保梗常茫瑁椋睿?; 

        2.Department?。铮妗。粒睿椋恚幔臁。樱悖椋澹睿悖濉。幔睿洹。裕澹悖瑁睿铮欤铮纾?,Beijing?。茫铮欤欤澹纾濉。铮妗。粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍澹拢澹椋辏睿?,102206,China) 

        AbstraCt:The?。穑酰颍穑铮螅濉。铮妗。簦瑁椋蟆。螅簦酰洌。鳎幔蟆。簦铩。椋睿觯澹螅簦椋纾幔簦濉。簦瑁濉。澹妫妫澹悖簟。铮妗。樱椋辏酰睿椤。洌澹悖铮悖簦椋铮睢。铮睢。颍澹穑幔椋颉。铮妗。簦瑁濉?/p>

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        Key?。鳎铮颍洌螅海椋睿螅酰欤椋睢欤椋耄濉。纾颍铮鳎簦琛。妫幔悖簦铮蛞唬?;PCNA;jejunum;spleen-deficiency 

        Corresponding?。幔酰簦瑁铮颍海兀铡。剩椋幔睢瘢椋睿海蹋桑铡。疲澹睿纭瑁酰帷?/p>

        中(獸)醫(yī)脾虛證多表現(xiàn)消化系統(tǒng)功能障礙,證 動(dòng)一系列反應(yīng)保證黏膜結(jié)構(gòu)的完整性,其中一個(gè)重 

        見(jiàn)完谷不化,食后作瀉,大便稀溏,消瘦等。近年來(lái) 要的反應(yīng)是腸組織再生,這是由腸干細(xì)胞參與的非 

        研究表明,脾虛證患者和大鼠模型的胃腸道組織會(huì) 常復(fù)雜的過(guò)程。細(xì)胞增殖標(biāo)記物一增殖細(xì)胞核抗原 

        出現(xiàn)病理變化,如胃黏膜變薄,小腸絨毛損傷、萎縮, 

        (Proliferating?。茫澹欤臁。危酰悖欤澹幔颉。粒睿簦椋纾澹?,簡(jiǎn)稱PCNA) 

        細(xì)胞器非正常變化等Ⅲ。當(dāng)腸黏膜損傷時(shí),機(jī)體啟 

        是DNA聚合酶的重要輔助因子,常作為評(píng)價(jià)細(xì)胞 

        增殖狀態(tài)的重要指標(biāo)[2]。腸道隱窩干細(xì)胞的分裂狀 

        收稿日期:2011-08-26 

        基金項(xiàng)目:高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20100008110— 

        態(tài)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。PCNA生長(zhǎng)因子可以調(diào)節(jié)多種 

        024);國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30771591) 

        細(xì)胞的增殖、移行和分化,在維持腸黏膜穩(wěn)態(tài)及其結(jié) 

        作者簡(jiǎn)介:劉發(fā)強(qiáng)(1986一),男,碩士生,研究方向?yàn)橹形鳙F醫(yī)結(jié) 構(gòu)完整性方面發(fā)揮著重要作用_3]。有研究表明,胰 

        合,E-mail:liufaqiangl11@163.eom;何玉英(1964一),女,實(shí)驗(yàn)師,碩 島素樣生長(zhǎng)因子一1(insulin-like growth?。妫幔悖簦铮蛞唬?, 

        士,主要從事小動(dòng)物的臨床檢驗(yàn),E-mail:hyyy@sina.corn 

        注:何玉英和劉發(fā)強(qiáng)對(duì)本文有同等貢獻(xiàn) 

        IGF一1)可以加速腸黏膜損傷后的修復(fù)過(guò)程_4]。 

        通訊作者:許劍琴,E-mail:jianqinxucau@126.eom;劉風(fēng)華, 

        四君子顆粒由黨參、白術(shù)、茯苓和甘草四味中藥 

        E-mail:liufenghua12O9@126.eom 組成,是治療脾虛證的經(jīng)典方劑。目前已有研究表 

        58 中國(guó)獸醫(yī)雜志2012年(第48卷)第5期?。茫瑁椋睿澹螅濉。剩铮酰颍睿幔臁。铮妗。郑澹簦澹颍椋睿幔颍。停澹洌椋悖椋睿濉?/p>

        明,四君子湯對(duì)大鼠和小鼠小腸免疫功能、胃腸運(yùn)動(dòng) 

        水合。二甲苯5?。恚椋钕矗泊?,二甲苯:無(wú)水乙醇 

        (1:1)5?。恚椋钕矗贝危瑹o(wú)水乙醇5?。恚椋钕矗泊?,95 、 等生理活動(dòng)有重要調(diào)節(jié)作用-5 ],但在脾虛動(dòng)物腸黏 

        膜損傷修復(fù)過(guò)程中作用研究甚少??漳c是食物消 

        化、吸收的主要部位,為此,本試驗(yàn)檢測(cè)空腸中PC— 

        NA和IGF一1的表達(dá),探討經(jīng)典方劑四君子湯對(duì)脾 

        虛大鼠空腸修復(fù)過(guò)程的影響,為中獸醫(yī)脾虛證之實(shí) 

        9O 、8O 、7O 、50 的乙醇各5?。恚椋钕矗贝?, 

        ddH?。病。稀。怠。恚椋钕矗贝?,PBS?。怠。恚椋钕矗炒?。(2)抗原 

        修復(fù)。用檸檬酸鈉緩沖液(pH值6.O)于微波爐中 

        質(zhì)、四君子湯的藥理作用機(jī)制和臨床應(yīng)用提供理論 

        煮沸(高火5?。恚椋睿械突穑场。恚椋睢。炒危?。修復(fù)后,組 

        織切片自然涼至室溫。(3)封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶 

        基礎(chǔ)?!?/p>

        1材料與方法 

        1.1藥物及主要試劑、設(shè)備成年SD雄性大鼠24 

        只,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。利 

        血平注射液(1 mg/mL),購(gòu)自廣東邦民制藥有限公 

        司。四君子顆粒(黨參、白術(shù)、茯苓和炙甘草),購(gòu)自 

        湖北武當(dāng)生物制藥有限公司。石蠟(Sigma公司,美 

        國(guó));蘇木精、伊紅(Sigma公司,美國(guó));乙醇、二甲苯 

        (dk京化工廠);兔抗大鼠PCNA多抗(北京博奧森 

        生物技術(shù)有限公司);兔抗大鼠IGF一1單抗(Santa 

        Cruz,美國(guó));兔抗體免疫組化試劑盒(南京凱基生物 

        技術(shù)發(fā)展有限公司);BH 型生物顯微鏡(Olympus, 

        日本)?!?/p>

        1.2動(dòng)物分組、處理和樣本采集 試驗(yàn)大鼠24只 

        適應(yīng)性飼養(yǎng)3?。浜?,隨機(jī)分為對(duì)照組、脾虛組、四君 

        子顆粒治療組和治療對(duì)照組,每組6只。試驗(yàn)第1 

        ~7天,脾虛組、四君子顆粒治療組和治療對(duì)照組大 

        鼠以0.5 mL/kg體重[7 劑量腹腔注射利血平,對(duì)照 

        組以相同劑量和方法注射生理鹽水。試驗(yàn)第8天, 

        處死脾虛組和對(duì)照組所有大鼠,每只大鼠取空腸中 

        段5 cm,置于4 中性甲醛溶液固定,用于制作石蠟 

        切片。四君子顆粒治療組于試驗(yàn)第8天開(kāi)始每天灌 

        服濃度為0.5 g/mL的四君子顆粒,8 mL/kg?d(劑 

        量根據(jù)人和大鼠體重?fù)Q算,系數(shù)為0.018[1?!?;四君子 

        顆粒用蒸餾水溶解),治療對(duì)照組灌服相同劑量生理 

        鹽水,連續(xù)5?。?,于試驗(yàn)第13天處死兩組大鼠,采樣 

        及樣本處理和保存方法同脾虛組?!?/p>

        1.3 空腸組織H_E.染 石蠟切片經(jīng)二甲苯常 

        規(guī)脫蠟,二甲苯:無(wú)水酒精(1:1)、無(wú)水酒精95 

        ~5O 下行梯度酒精中各5?。恚椋?,蘇木精染約1O 

        min,蒸餾水沖洗、0.5 鹽酸分后,自來(lái)水沖洗藍(lán) 

        化30?。恚椋?,經(jīng)蒸餾水沖洗、酒精脫水上行至95 后, 

        放入0.5 伊紅酒精染液染30 S,再依次入95?。梗丁?/p>

        酒精、無(wú)水酒精、二甲苯,最后用中性樹(shù)膠封片?!?/p>

        光鏡下觀察比較各組大鼠腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的變 

        化,采用Image—Pro Plus?。担眻D像分析系統(tǒng),測(cè)量 

        空腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度,每個(gè)腸道組織切片選?。怠?/p>

        視野進(jìn)行統(tǒng)計(jì),取其平均值?!?/p>

        1.4?。校茫危梁停桑牵疲泵庖呓M織化學(xué)法染 常規(guī) 

        方法制作石蠟切片,切片厚度4?。?。(1)常規(guī)脫蠟 

        3?。龋病。希彩覝胤跤玻啊。恚椋?。PBS中5 min洗3次?!?/p>

        (4)1%山羊血清37℃封閉20?。恚椋?。(5)一抗孵育?!?/p>

        組織切片于200倍稀釋的抗體溶液中4℃孵育過(guò) 

        夜。PBS中5 min洗3次。(6)在抗兔生物素化二 

        抗中,37℃孵育30?。恚椋?。PBS洗3次,每次5?。恚椋睢!?/p>

        (7)在鏈親和素標(biāo)記HRP溶液中,37℃孵育30 

        min。PBS洗3次,每次5?。恚椋?。(8)DAB顯2~5 

        min,顯微鏡下掌控。ddH?。跋矗炒?,每次5?。恚椋??!?/p>

        (9)蘇木精復(fù)染10 min,1 鹽酸酒精分化,脫水、透 

        明后,中性樹(shù)膠封片。 

        每組中隨機(jī)選?。持淮笫蟮那衅?,每個(gè)切片高 

        倍鏡下隨機(jī)選?。祩€(gè)視野,觀察染情況。PCNA 

        染結(jié)果以空腸每個(gè)隱窩PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表示; 

        IGF一1染結(jié)果以平均每個(gè)視野的IGF一1陽(yáng)性細(xì)胞 

        數(shù)表示?!?/p>

        1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS?。樱簦幔簦椋螅簦椋悖蟆。保罚敖y(tǒng)計(jì)軟 

        件,顯著性分析采用t檢驗(yàn),結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差 

        表示。 

        2 結(jié)果 

        2.1 臨床觀察脾虛組、四君子顆粒治療組和治療 

        對(duì)照組大鼠在試驗(yàn)第3天出現(xiàn)精神倦怠、蜷縮,飲 

        食、飲水量下降;試驗(yàn)第5天出現(xiàn)體重降低、門(mén)污 

        穢、大便稀溏、被毛凌亂等癥狀。停止注射利血平至 

        第13天取樣前,四君子顆粒治療組大鼠的精神狀 

        態(tài)、體重、飲食、飲水恢復(fù)程度明顯好于治療對(duì)照組?!?/p>

        2.2大鼠空腸形態(tài)學(xué)觀察?。龋牛竞笥^察,脾 

        虛組大鼠空腸絨毛頂端表皮脫落,絨毛、隱窩萎縮。 

        四君子顆粒治療組的絨毛高度、隱窩深度顯著高于 

        治療對(duì)照組(P<0.05);兩組空腸絨毛頂端損傷現(xiàn) 

        象基本消失。見(jiàn)圖1、2?!?/p>

        2.3 PCNA的免疫組化檢測(cè) 中插彩版圖3和表 

        1結(jié)果顯示,PCNA在4組大鼠空腸中都有表達(dá)?!?/p>

        每個(gè)隱窩PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)脾虛組極顯著少于對(duì) 

        照組(PG0.01);四君子顆粒治療組顯著多于治療 

        對(duì)照組(PG0.05)。 

        2.4?。桑牵埔唬钡拿庖呓M化檢測(cè)表1結(jié)果顯示,大鼠 

        空腸中IGF一1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)脾虛組極顯著少于對(duì)照組 

        (PG0.01);四君子顆粒治療組極顯著多于治療對(duì) 

        照組(PG0.01)?!?/p>

        60 中國(guó)獸醫(yī)雜志2012年(第48卷)第5期 Chinese?。剩铮酰颍睿幔臁。铮妗。郑澹簦澹颍椋睿幔颍。停澹洌椋悖椋睿濉?/p>

        中藥復(fù)方對(duì)慢性熱應(yīng)激蛋雞肺臟鈣含量 

        及熱休克蛋白70表達(dá)量的影響 

        段凱文,宋曉琳,郭 浩,高志民,石達(dá)友,郭世寧 

        (華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣東廣州510642) 

        摘要:選用體質(zhì)健康,體重、產(chǎn)蛋率基本一致的6o周齡海藍(lán)白蛋雞250只,隨機(jī)分為5組:中藥復(fù)方I、Ⅱ、Ⅲ組、電解多維 

        組、高溫對(duì)照組。本試驗(yàn)檢測(cè)蛋雞肺臟中鈣含量,并采用ELISA法測(cè)定蛋雞肺臟組織熱休克蛋白70(HSPT0)表達(dá)量。結(jié)果 

        顯示,復(fù)方中藥能夠提高肺臟鈣離子(Ca?。舛群停龋樱校罚氨磉_(dá)量。復(fù)方I組能明顯提高Ca 濃度。各藥物組的肺臟HSP70 

        含量均高于高溫對(duì)照組,其中復(fù)方Ⅲ組最為明顯,但是復(fù)方I組對(duì)HSP70的增加效果最顯著。結(jié)果表明,HSP70與鈣含量變 

        化呈一定的正相關(guān),中藥有可能通過(guò)提高鈣離子濃度而實(shí)現(xiàn)對(duì)HSP7O的調(diào)控?!?/p>

        關(guān)鍵詞:中藥復(fù)方;熱應(yīng)激;鈣;熱休克蛋白70 

        中圖分類號(hào):¥853.74 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 

        , 

        文章編號(hào):0529—6005(2012)05—0060—03 

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        高溫季節(jié),蛋雞易發(fā)生熱應(yīng)激,在中醫(yī)理論中, 

        熱應(yīng)激被稱為暑熱證或中暑,是暑邪和濕熱乘機(jī)體 

        上應(yīng)先清熱利濕,濕邪得化,則蘊(yùn)熱之因除,兩邪得 

        以分解,病即可轉(zhuǎn)機(jī) 。近年來(lái)中藥的研發(fā)與使用 

        越來(lái)越受到人們的重視,應(yīng)用中藥防治畜禽熱應(yīng)激 

        作者簡(jiǎn)介:段凱文(1987一),女,碩士生,從事中草藥抗熱應(yīng)激方 

        面研究,E—mail:491122198@qq.corn 

        通訊作者:郭世寧,E—mail:shining@scau.edu.cn 

        正氣不足之機(jī)侵犯機(jī)體所致,屬濕熱證 。在治療 

        收稿日期:2011-07—26 

        基金項(xiàng)目:“十一五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2008BAQB4B01— 

        6);廣東省教育部產(chǎn)學(xué)研結(jié)合項(xiàng)目(2008B09050025G);廣東省中國(guó)科 

        學(xué)院全面戰(zhàn)略合作資助項(xiàng)目(2010B090301040) 

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        459. 

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        ganization,2009,8:1843—1854. 

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