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        第17章 支原體

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        2022年4月22日發(fā)(作者:卵巢腫瘤病因)

        第17章支原體

        支原體(mycoplasma)是目前已知一類沒有細胞壁能在無生命培養(yǎng)基上生長

        繁殖的最小的原核細胞型微生物。因能形成有分枝的長絲,故稱支原體。

        特點:因缺乏細胞壁,呈高度的多形性,細胞膜含固醇,能通過0.45um濾

        菌器;以二分裂繁殖為主,含DNA與RNA兩種核酸。

        支原體過去曾稱為類胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-like

        organism,PPLO),1967年正式定為支原體。支原體的種類較多,在自然界的分

        布廣泛,并各有特定的宿主,包括人、家畜、家禽及實驗動物。實驗室用于組

        織培養(yǎng)的材料,常易被支原體污染給工作帶來地定困難。

        第一節(jié)概述

        支原體因其沒有細胞壁故歸屬于柔膜體綱(Mollicute)的支原體目

        (Mycoplasmatales)3個科:

        ①支原體科(Mycoplasmataceae),在支原體科中又分支原體(Mycoplasma)

        和脲原體(Ureaplama)2個屬。支原體屬現(xiàn)知有64個種,而脲原體屬僅2個種。

        其中對人致病的主要為肺炎支原體(niae)、人型支原體(s)、

        生殖器支原體(lium)、穿透支原體(aus)和溶脲脲原體

        (ticum)。

        ②無膽甾原體科(Acholeplasma-taceae),生長時不需要外源性膽固醇。

        ③螺原體科(Spiroplasmataceae),生長至一定階段呈螺形。

        一、生物學(xué)性狀體

        (一)形態(tài)與結(jié)構(gòu)

        1.形態(tài)與大?。褐гw的大小為0.2~

        0.3um,可通過濾菌器,常給細胞培養(yǎng)工作帶來

        污染的麻煩。無細胞壁,不能維持固定的形態(tài)

        而呈現(xiàn)多形性,呈球形、球桿形、長絲狀及分

        支狀等。圖17-1

        2.革蘭氏染陰性,但不易著,故常用Giemsa染法將其染成淡紫。

        3.結(jié)構(gòu):支原體的細胞膜由三層結(jié)構(gòu)組成,其中內(nèi)、外層的主要成分是蛋

        白質(zhì),而中層為脂質(zhì)。脂質(zhì)中膽固醇含量較多,約占36%,對保持細胞膜的完整

        性具有一定作用。凡能作用于膽固醇的物質(zhì)(如二性霉素B、皂素等)均可引起

        支原體膜的破壞而使支原體死亡。有的支原體在細胞膜外還有一層由多聚糖構(gòu)

        成的莢膜,有毒性,是支原體的一種致病因素。肺炎支原體的一端有一種特殊

        的頂端結(jié)構(gòu),能使支原體粘附于呼吸道粘膜上皮細胞表面,與致病性有關(guān)。

        4.基因組為一環(huán)狀以雙鏈DNA,分子量小(僅有大腸桿菌的五分之一),合

        成與代謝很有限。

        (二)培養(yǎng)特性

        1.營養(yǎng)要求比一般細菌高,除基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)外還需加入10~20%人或動物血

        清以提供支原體所需的膽固醇。最適pH7.8~8.0之間,低于7.0則死亡,但解

        脲脲原體最適pH6.0~6.5,因在培養(yǎng)時溶脲脲原體分解尿素產(chǎn)氨,可使培養(yǎng)基

        pH升高。當培養(yǎng)基指示劑變即需移種。否則將迅速死亡。

        2.大多數(shù)兼性厭氧,僅個別菌株專性厭氧。有些菌株在初分離時加入5%CO2

        生長更好。

        3.生長緩慢,在瓊脂含量較少的固體培養(yǎng)基上孵育

        2~3天出現(xiàn)典型的“荷包蛋樣”菌落:圓形(直徑:肺

        炎支原體100~150μm,溶脲脲原體10~40μm),核心

        部分較厚,向下長入培養(yǎng)基,周邊為一層薄的透明顆粒

        區(qū)(圖17-2)。此外,支原體還能在圖17-2

        雞胚絨毛尿囊膜或培養(yǎng)細胞中生長。4.繁殖方式多樣,主要為二分裂繁殖,還

        有分枝、出芽等方式,由于支原體分裂和其DNA復(fù)制不同步,可形成多核長絲

        體。

        (三)生化反應(yīng)

        一般能分解葡萄糖的支原體則不能利用精氨酸,能利用精氨酸的則不能分

        解葡萄糖,據(jù)此可將支原體分為兩類(見表17-1)。溶脲脲原體不能利用葡萄

        糖或精氨酸,但可利用尿素作能源。

        表17-1人類支原體的主要生物學(xué)性狀

        名稱需要膽固醇分解葡萄糖分解精氨酸吸附紅細胞

        肺炎支原體++-+

        人型支原體+-+-

        生殖支原體+---

        穿透支原體++-+

        溶脲脲原體----

        (四)抗原結(jié)構(gòu):支原體細胞膜上的抗原結(jié)構(gòu)由蛋白質(zhì)和糖脂組成。各種

        支原體均有其特有的抗原結(jié)構(gòu),交叉較少,在鑒定支原體時有重要意義。補體

        結(jié)合試驗取決于抗原的糖脂部分,ELISA試驗取決于抗原的蛋白質(zhì)部分。支原體

        的血清抗體可用作生長抑制試驗(growthinhibitiontest,GIT)和代謝抑制

        試驗(metabolicinhibitiontest,MIT)。應(yīng)用這兩種方法還可將某些支原體分

        成若干血清型,如溶脲脲原體可分為16型。

        試驗:操作步驟與藥敏試驗的紙片法相似,將沾有特異性抗血清紙片

        貼于劃有支原體的瓊脂平板表面,若兩者相應(yīng)則紙片周圍生長的菌落受到抑制。

        試驗:將支原體接種在一個含有血清與酚紅的葡萄糖培養(yǎng)基中,若抗

        體與支原體相應(yīng),則支原體的生成、代謝受到抑制,酚紅不變。

        (五)抵抗力

        1.支原體因無細胞壁對理化因素的影響比細菌敏感,容易被消毒劑滅活,

        對重金屬鹽、石炭酸、來蘇爾和一些表面活性劑較細菌敏感,但對醋酸鉈、結(jié)

        晶紫的抵抗力大于細菌。

        2.支原體對熱的抵抗力與細菌相似。

        3.對環(huán)境滲透壓敏感,滲透壓的突變可致細胞破裂。

        4.對影響細胞壁合成的抗生素如青霉素不敏感,對干擾蛋白質(zhì)合成的抗生

        素如紅霉素、強力霉素、四環(huán)素、鏈霉素及氯霉素等敏感。

        二、支原體與L型細菌的區(qū)別

        L型細菌是在抗生素、溶菌酶等作用下變成的一種細胞壁缺陷型細菌,其許

        多特性與支原體相似,在鑒定時很有必要將二者區(qū)別開來(見表)。

        表19-2支原體與L型細菌的區(qū)別

        支原體L型細菌

        自然界中廣泛存在自然界很少存在

        絕大多數(shù)生長需膽固醇生長不一定需要膽固醇

        在一般培養(yǎng)基中穩(wěn)定大多需高滲培養(yǎng)

        在遺傳上與細菌無關(guān),且無論在什在遺傳上與原菌相關(guān),并可在誘

        么條件下也不能變成細菌導(dǎo)因素去除后回復(fù)為原菌

        菌落較小,0.1~0.3mm菌落稍大,0.5~1.0mm

        三、主要病原性支原體

        (一)肺炎支原體(niae)

        1.傳播途徑:主要經(jīng)呼吸道(飛沫)傳播

        2.易感人:發(fā)病率以青少年最高

        3.發(fā)病季節(jié):一年四季均可發(fā)生,但多在秋冬時節(jié)。

        4.潛伏期:2~3周

        5.所致疾?。悍窝字гw是人類支原體肺炎的病原體,引起的肺炎占非細

        菌性肺炎的1/2左右。支原體肺炎的病理改變以間質(zhì)性肺炎為主,有時并發(fā)支

        氣管肺炎,稱為原發(fā)性非典型性肺炎。臨床癥狀較輕,甚至根本無癥狀,若有

        也只是頭痛、咽痛、發(fā)熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀,但也有個別死亡報道。

        (二)泌尿生殖道感染支原體

        引起泌尿生殖道感染的支原體主要有溶脲脲原體、人型支原體和生殖支原

        體,現(xiàn)已被列為性傳播性疾病的病原體。在非淋菌性尿道炎(NGU)中,感染率

        僅次于衣原體。

        1.溶脲脲原體(ticum):又稱T株支原體(Tinystrain)。通常

        寄居在人的泌尿生殖道粘膜,引起非細菌性尿道炎,也能引起盆腔等部位的感

        染。還可通過胎盤感染胎兒,可致流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎;在分娩時感染新生兒,

        可引起呼吸道感染或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀;還可引起婦女不孕。

        溶脲脲原體引起不的原因:

        (1)吸附于精子表面,阻止精子的運動。

        (2)產(chǎn)生神經(jīng)氨酸樣物質(zhì)干擾精子和卵子的結(jié)合。

        (3)與精子有共同抗原成分,對精子可造成免疫損傷。

        溶脲脲原體的分離可用加尿素和酚紅的含血清支原體肉湯。肉湯中可加青

        霉素抑制雜菌的生長。溶脲脲原體具有尿素酶,可分解尿素產(chǎn)氨,使酚紅變紅。

        在固體培養(yǎng)基上用低倍鏡觀察,可見有微小的荷包蛋樣菌落或顆粒樣菌落生長。

        免疫斑點試驗。

        2.人型支原體(s):能引起滲出性咽炎及尿道炎,也與卵巢膿

        腫、產(chǎn)褥熱等有關(guān)。

        3.生殖支原體(lium):與泌尿生殖道感染有關(guān)。

        4.發(fā)酵支原體(tans):與呼吸道疾病的關(guān)系更為密切。也與某些類

        風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病有關(guān)。

        5.口腔支原體()與唾液支原體(rium):寄居在人的口咽

        部,均為正常菌。

        (三)穿透支原體

        穿透支原體是1990年首次從1例HIV陽性艾滋病患者尿中分離出的一種新

        支原體,形態(tài)為桿狀或長瓶狀。

        四、實驗室診斷

        (一)分離培養(yǎng)與鑒定:

        加10%~20%馬或小牛血清于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。初次分離培養(yǎng)生長緩慢,菌落

        呈典型的油煎蛋樣。治療用紅霉素、四環(huán)素、強力霉素等高度敏感的抗生素。

        分離的支原體經(jīng)形態(tài)、生化反應(yīng)作初步鑒定,進一步經(jīng)生長抑制試驗(GIT)與

        代謝抑制試驗(GIT)確定。

        (一)抗體的檢測:補體結(jié)合試驗或放射免疫技術(shù)等。

        (二)凝集試驗及株鏈菌凝集試驗。

        (四)DNA探針

        (五)PCR技術(shù)

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