附件1：

肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑注冊技

術(shù)指導(dǎo)原則

(征求意見稿)

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對肺炎支原體IgM/IgG

抗體檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審

評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑的

一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是

否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，

并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和

細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不

包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，

如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但

需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相

關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水

平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的

不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

肺炎支原體（Mycoplasmapneumonia，Mp）屬于

柔膜體綱，支原體屬，是引起人類呼吸道感染的常見病原

微生物，是我國兒童和獲得性肺炎（community-

acquiredpneumonia，CAP）的重要致病原之一。Mp感

染廣泛存在于世界各地，平時散在性發(fā)病，每隔數(shù)年會出

現(xiàn)地區(qū)周期性流行，每次流行持續(xù)數(shù)月到數(shù)年不等。對于

聚性發(fā)病或初始經(jīng)驗(yàn)性治療無效的CAP患者，住院或重

癥CAP患者，建議進(jìn)行致病原檢查，明確CAP致病原可有

助于進(jìn)行目標(biāo)性抗感染治療。

根據(jù)肺炎支原體主要黏附基因P1基因的重復(fù)序列

RepMP2/3或RepMP4，肺炎支原體可分為I型和II型兩個

基因型，不區(qū)分血清型。

肺炎支原體的檢測對于支原體肺炎的治療至關(guān)重要，

實(shí)驗(yàn)室檢測方法包括病原體培養(yǎng)、抗原檢測、抗體檢測和

核酸檢測。肺炎支原體培養(yǎng)難度較大，需采用專門的培養(yǎng)

基和培養(yǎng)技術(shù)，耗時長，敏感性低，但特異性好。血清特

異性抗體檢測是目前診斷肺炎支原體肺炎的重要手段，免

疫層析法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法抗體檢測試劑在臨床

中廣泛應(yīng)用。顆粒凝集（particleagglutination，PA）試

驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合（complementfixation，CF）試驗(yàn)是檢測

肺炎支原體抗體的傳統(tǒng)方法，但無法區(qū)分IgG和IgM。

本指導(dǎo)原則所述肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑是

指采用膠體金法、熒光免疫層析法、酶聯(lián)免疫法、酶免滲濾

法或化學(xué)發(fā)光法，體外定性檢測人血清、血漿或全血中的肺

炎支原體IgM和/或IgG抗體的試劑。結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)

室指標(biāo)，可用于肺炎支原體感染的輔助診斷。對基于其他方

法學(xué)的試劑，及肺炎支原體其他抗體或總抗體檢測試劑，可

能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請人可

以根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價或補(bǔ)充其他的評價資

料進(jìn)行相應(yīng)驗(yàn)證。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物

安全性的說明、主要研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市

情況介紹等內(nèi)容。產(chǎn)品描述中應(yīng)說明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，

選擇捕獲法或間接法的考慮。同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)

著重從方法學(xué)、檢測原理、特異性抗原等主要組成成分、樣

本類型等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同

類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

（二）主要原材料的研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料一般包括抗原、抗體、對照品、

質(zhì)控品、校準(zhǔn)品、參考品等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)

提供其詳細(xì)的選擇、制備、鑒定和質(zhì)量控制過程；如主要原

材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對

比篩選試驗(yàn)資料、選定的供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商提供的原材料

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)

資料，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。申請人應(yīng)對各主要原

材料均明確質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1.肺炎支原體抗原

肺炎支原體抗原決定了檢測的敏感度和特異性，對抗體

檢測試劑至關(guān)重要。應(yīng)注重抗原的選擇，詳細(xì)描述抗原的名

稱，天然/重組表達(dá)信息及選擇該抗原的依據(jù)。提交抗原來源、

制備、純化、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分

子量、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

2.抗人IgM/IgG單克隆抗體

詳述抗體的選擇過程，提交抗體生物學(xué)來源、免疫原及

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價、功能性

試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

3.試劑盒質(zhì)控線/對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品

免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品應(yīng)設(shè)置質(zhì)控線，詳述質(zhì)控線相關(guān)

抗體的選擇依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

對照品/質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個水平。陽性對

照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品可選擇經(jīng)合理稀釋的臨床陽性樣本，陰

性對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。

提交相關(guān)原料的來源、選擇和性能確認(rèn)等相關(guān)研究資料，明

確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對對照品/質(zhì)控品的檢測結(jié)

果做出明確的范圍要求（試驗(yàn)有效性的判斷）。

4.其他主要原輔料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原輔料，

如膠體金、辣根過氧化物酶、吖啶酯、硝酸纖維素膜、微孔

板、磁微粒、樣本稀釋液等，均應(yīng)進(jìn)行選擇及驗(yàn)證，并提交

相關(guān)資料。明確主要原輔料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。免疫

層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細(xì)胞去除方式及

相關(guān)原材料，并驗(yàn)證去除效果。

5.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品是保證產(chǎn)品性能穩(wěn)定的重要構(gòu)成之一。應(yīng)提

交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度

確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待

測樣本相同。企業(yè)參考品的設(shè)置應(yīng)至少包括：陽性參考品、

陰性參考品、檢測限參考品和重復(fù)性參考品。其中陽性參考

品重在評估產(chǎn)品的包容性，應(yīng)選擇不同來源的臨床樣本，并

設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)可評價產(chǎn)品的特異性，建

議包括含有類風(fēng)濕因子、其他病原體抗體等可能的干擾和交

叉樣本，對于檢測肺炎支原體IgM抗體的試劑，陰性參考品

中建議包括肺炎支原體IgG抗體陽性樣本。檢測限參考品可

設(shè)置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含檢測限水平。

重復(fù)性參考品可設(shè)置高、低兩個濃度的臨床樣本，其中一個

濃度在最低檢出限附近。對于同時檢測肺炎支原體IgM和

IgG抗體的試劑，企業(yè)參考品需對IgM抗體和IgG抗體分別

設(shè)置。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

2.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說

明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

3.包被/標(biāo)記工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、

濃度、時間、條件等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定

上述指標(biāo)的最佳組合。

4.顯系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

5.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、判讀時間、反

應(yīng)溫度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對產(chǎn)品性

能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

6.反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過實(shí)驗(yàn)確

定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要

的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對樣本稀

釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。對于IgM

抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG

對結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟（例如

采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設(shè)計

中關(guān)于避免IgG影響IgM檢測結(jié)果的合理措施，盡量減少特

異性IgG對IgM檢測造成的假陰性和假陽性。

（四）分析性能研究資料

企業(yè)應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的

試劑盒進(jìn)行的所有性能評估資料，包括具體研究方法、實(shí)驗(yàn)

方案、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評估

的背景信息也應(yīng)在申報資料中進(jìn)行描述，包括試驗(yàn)地點(diǎn)，試

驗(yàn)采用的試劑名稱、規(guī)格和批號，儀器名稱和型號，樣本類

型和來源等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國

臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國內(nèi)有關(guān)

體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行，建議著重對以下分

析性能進(jìn)行研究。

1.企業(yè)參考品檢驗(yàn)

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采

用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.最低檢測限

建議采用已明確肺炎支原體抗體滴度的陽性臨床樣本，

采用陰性樣本進(jìn)行系列稀釋，進(jìn)行最低檢測限的建立和驗(yàn)證

評價。應(yīng)采用合理方法確認(rèn)抗體類型和滴度，提供詳細(xì)的確

認(rèn)方法及結(jié)果。

2.1選取至少3份臨床樣本，系列稀釋獲得多個濃度梯

度，每個濃度重復(fù)檢測不少于3次，以100%可檢出的最低濃

度水平作為預(yù)設(shè)檢測限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣

品，每個濃度至少重復(fù)檢測20次，將具有95%陽性檢出率的

最低濃度作為最低檢測限。

2.2選擇與2.1不同的3份臨床樣本，采用陰性基質(zhì)稀釋

到最低檢測限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。

3.陰陽性符合率

應(yīng)選擇中國境內(nèi)來源于不同地域、不同人的多份臨床

確診且經(jīng)合理方法判定肺炎支原體抗體陽性的患者樣本進(jìn)

行檢測，建議覆蓋已知基因型，檢測結(jié)果的陰陽性應(yīng)與預(yù)期

結(jié)果相符。

對于肺炎支原體IgM抗體檢測試劑，還需選擇IgM單陽

性樣本進(jìn)行顆粒凝集試驗(yàn)，以滴度1：160作為陽性判定標(biāo)

準(zhǔn)，申報試劑對滴度1：160的樣本檢測結(jié)果應(yīng)為陽性。

4.精密度

申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)

準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。應(yīng)對可能影響檢測精密度的主要

變量進(jìn)行驗(yàn)證，包括不同時間、地點(diǎn)、操作者、檢測輪次、

試劑批次、適用儀器（如適用）等。

設(shè)定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢

測。至少采用3個水平的臨床樣本進(jìn)行精密度評價，具體要

求如下：

4.1陰性樣本：待測物濃度低于最低檢測限或?yàn)榱銤舛龋?/p>

陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

4.2臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑盒的最低檢

測限，陽性檢出率應(yīng)大于95%（n≥20）。

4.3中/強(qiáng)陽性樣本：待測物濃度呈中度到強(qiáng)陽性，陽性

檢出率為100%且CV≤15%（如適用）（n≥20）。

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng)

應(yīng)對肺炎支原體的近緣微生物，易引起相同或相似的臨

床癥狀，及易合并感染的微生物（表1），高濃度肺炎支原體

特異性IgG抗體/特異性IgM抗體進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

如果試劑原料采用基因重組抗原，則還需考慮對重組基

因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評價。例如，如果采用

大腸埃希菌作為宿主菌，建議考慮大腸埃希菌抗體陽性樣本

可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

交叉反應(yīng)用臨床樣本中相關(guān)病原體抗體滴度水平應(yīng)較

高，并且抗體類型（IgM、IgG）應(yīng)與申報試劑檢測抗體類型

一致。提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣本來源、陰陽性和滴

度確認(rèn)等信息。

表1用于交叉反應(yīng)研究的病原體（*為必做項(xiàng)目）

肺炎支原體的近緣微生物：解脲支原

體*，生殖支原體*，人型支原體*

肺炎鏈球菌*

肺炎衣原體*

流感嗜血桿菌*

肺炎克雷伯菌*

金黃葡萄球菌*

結(jié)核分枝桿菌*

嗜肺軍團(tuán)菌*

銅綠假單胞菌*

鮑曼不動桿菌

結(jié)核分枝桿菌

流感病毒

副流感病毒

鼻病毒

腺病毒

人偏肺病毒

呼吸道合胞病毒

5.2干擾試驗(yàn)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究。

建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）

下，采用待測抗體為弱陽性和陰性水平的多例樣本進(jìn)行試驗(yàn)，

應(yīng)至少包括下列可能的干擾物質(zhì)。

5.2.1內(nèi)源性物質(zhì)：血紅蛋白、膽紅素、血脂、類風(fēng)濕因

子、其他自身免疫性抗體，異嗜性抗體（如HAMA）、總IgG、

總IgM、紅細(xì)胞壓積（全血樣本適用），高濃度肺炎支原體特

異性IgG抗體與特異性IgM抗體的干擾。

5.2.2常見治療物：左氧氟沙星、莫西沙星、吉米沙

星等喹諾酮類抗菌藥物、阿奇霉素、克拉霉素、紅霉素等大

環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物、多西環(huán)素、米諾環(huán)素等四環(huán)素類抗菌藥

物。

5.2.3癥狀相關(guān)其他經(jīng)驗(yàn)物。

5.2.4抗凝劑：如果試劑盒適用樣本類型包括血漿、全血

樣本，可采用一定數(shù)量同源樣本進(jìn)行比對試驗(yàn)的方法，或采

用回收試驗(yàn)的方法，驗(yàn)證各種抗凝劑的適用性。

抗體破壞試驗(yàn)

對于肺炎支原體IgM抗體檢測試劑，建議對至少5份含

有肺炎支原體特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞實(shí)驗(yàn)研究，

方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）

處理樣本后，重新進(jìn)行檢測，IgM檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

7.鉤狀（HOOK）效應(yīng)研究

須采用多份高滴度樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高

濃度開始檢測，每個梯度的稀釋液重復(fù)3～5份，對鉤狀效應(yīng)

進(jìn)行合理的驗(yàn)證。

8.其他需注意問題

對于使用儀器進(jìn)行結(jié)果判讀的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書

【適用機(jī)型】項(xiàng)中所有型號儀器的性能評估資料。

9.適用的樣本類型

如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗(yàn)證樣本的

可比性。如產(chǎn)品適用于全血，建議進(jìn)行最低檢測限、陰陽性

符合率和精密度研究，同時進(jìn)行同源比對試驗(yàn)。

（五）陽性判斷值確定資料

提交對申報試劑陰性/陽性結(jié)果判斷的陽性判斷值

（cut-off）確定資料，包括具體的試驗(yàn)方案、人及樣本選

擇、評價標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。建立陽性判斷值

的樣本選擇應(yīng)考慮到不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生

理狀態(tài)等因素的影響，納入陰性、陽性及臨界值附近的樣本。

如檢測結(jié)果為數(shù)值形式，建議采用受試者工作特征曲線

（receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC）的分

析方式來確定合理的陽性判斷值；如試驗(yàn)結(jié)果存在灰區(qū)

（equivocalzone），應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。

如產(chǎn)品適用多個樣本類型，應(yīng)明確不同的樣本類型是否

存在差異，如無差異，可采用一個樣本類型進(jìn)行陽性判斷值

確定后，對其他樣本類型進(jìn)行驗(yàn)證。如有差異，應(yīng)分別進(jìn)行

陽性判斷值的確定。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定

性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

1.申報試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時穩(wěn)定性（有效期）、開

瓶（開封）穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性（如涉及）、機(jī)載穩(wěn)定性（如

涉及）、運(yùn)輸穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理

的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定

依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)

時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存

至成品有效期后的研究資料。如果產(chǎn)品配套校準(zhǔn)品，還應(yīng)對

校準(zhǔn)頻率進(jìn)行研究。

2.適用樣本的穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲存（常溫、

冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條

件及保存時間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時

間段即對儲存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定

性。可冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。

另外，如果可采用加熱后樣本（如熱滅活）進(jìn)行檢測，

則應(yīng)對加熱前后的肺炎支原體特異性IgM/IgG抗體陽性樣本

進(jìn)行加熱因素的干擾驗(yàn)證，方法為對臨界值附近的至少5份

弱陽性加熱和未加熱樣本進(jìn)行對比檢測，比較檢測結(jié)果的差

異。

（七）臨床評價資料

開展臨床試驗(yàn)應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)

原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）

的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后

的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。

1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，選擇不少于3家（含

3家）已備案且具備該產(chǎn)品臨床試驗(yàn)?zāi)芰Φ呐R床機(jī)構(gòu)開展臨

床試驗(yàn)。

2.臨床試驗(yàn)適用人

申請人應(yīng)選擇體征/癥狀符合呼吸道感染的目標(biāo)人，臨

床試驗(yàn)的受試人應(yīng)盡可能全面地代表預(yù)期人。臨床上，

學(xué)齡前、學(xué)齡兒童及青少年為肺炎支原體的易感人，在進(jìn)

行臨床試驗(yàn)時應(yīng)注意入組受試者代表性。建議受試者中易感

人比例不低于50%，且受試者年齡分布應(yīng)均衡。

3.臨床試驗(yàn)方法

臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品

（對比試劑）進(jìn)行比較研究的方法，評價兩種方法檢測結(jié)果

的一致性，評價指標(biāo)通常包括陽性符合率、陰性符合率等。

對比試劑在預(yù)期用途、適用人、樣本類型、檢測方法學(xué)、

檢測性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比

性?？紤]到試驗(yàn)用體外診斷試劑的預(yù)期用途，臨床試驗(yàn)中陽

性和陰性樣本均應(yīng)包括一定量的新鮮樣本。

體外診斷試劑的比較研究試驗(yàn)中應(yīng)對受試者樣本設(shè)盲，

并使檢測順序隨機(jī)，以避免因操作者和檢測結(jié)果的評價者知

曉受試者的疾病診斷或?qū)Ρ仍噭z測結(jié)果等信息而引入偏

倚。對于結(jié)果不一致的樣本建議通過合理的方式進(jìn)行分析，

分析方式包括不一致樣本的第三方試劑復(fù)測、與金標(biāo)準(zhǔn)的一

致性研究等。

對于肺炎支原體特異性IgM檢測試劑，申請人還應(yīng)對急

性期患者樣本進(jìn)行試驗(yàn)用體外診斷試劑與急性期確認(rèn)參考

方法的一致性研究，以評價試驗(yàn)用體外診斷試劑的臨床靈敏

度。選擇不少于30例處于感染急性期患者的新鮮采集樣本。

急性期確認(rèn)參考方法一般包括：肺炎支原體特異性IgG抗體

的血清學(xué)轉(zhuǎn)換（動態(tài)監(jiān)測2份或以上的血清IgG，恢復(fù)期與

急性期比較IgG呈4倍以上升高），呼吸道樣本（咽拭子、痰

液等）核酸檢測或分離培養(yǎng)等。

4.樣本類型

肺炎支原體抗體檢測試劑的樣本類型通常涉及血清、血

漿及全血。臨床試驗(yàn)時應(yīng)以其中一種樣本類型為主進(jìn)行臨床

試驗(yàn)。其他樣本類型可通過同源樣本一致性比對方式進(jìn)行樣

本類型適用性臨床驗(yàn)證。如血清與血漿樣本之間經(jīng)驗(yàn)證不存

在性能差異，可以在各具有一定數(shù)量的前提下，通過合并統(tǒng)

計的方式證明兩種樣本類型的適用性。

臨床樣本的采集、處理、保存等應(yīng)分別滿足臨床試驗(yàn)中

所涉及各產(chǎn)品說明書相關(guān)要求。

5.樣本量

建議采用單組目標(biāo)值法估算臨床試驗(yàn)的最低樣本量，通

過陽性符合率計算所需陽性樣本的例數(shù)，通過陰性符合率計

算所需陰性樣本的例數(shù)，同時考慮脫落情況，估算最低樣本

總量。試驗(yàn)用體外診斷試劑所能達(dá)到的陽性符合率和陰性符

合率的目標(biāo)值建議經(jīng)過小規(guī)模預(yù)試驗(yàn)獲得。建議陽性符合率

目標(biāo)值設(shè)定不低于92%，陰性符合率目標(biāo)值設(shè)定不低于96%。

試驗(yàn)用體外診斷試劑預(yù)期陽性符合率與預(yù)期陰性符合率應(yīng)

根據(jù)產(chǎn)品前期驗(yàn)證情況或臨床預(yù)試驗(yàn)確定。

6.臨床試驗(yàn)方案

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案應(yīng)一致，且保證在整個臨床試驗(yàn)

過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣

本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。同時，

所制定的臨床試驗(yàn)方案應(yīng)符合所涉及各產(chǎn)品說明書的要求。

7.統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)對臨床試驗(yàn)入組情況及數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)的描述及

統(tǒng)計，建議對不同年齡段人入組情況進(jìn)行說明。

選擇2×2列聯(lián)表的形式展示兩種試劑的定性檢測結(jié)果。

計算陰性符合率、陽性符合率、總符合率及相應(yīng)的95%置信

區(qū)間，同時需進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)。

8.臨床試驗(yàn)報告

應(yīng)對試驗(yàn)的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡

述，應(yīng)該對整個臨床試驗(yàn)設(shè)計、實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論

等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方

法、必要的討論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根

據(jù)產(chǎn)品研制、臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及

有關(guān)文獻(xiàn)資料，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》

（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有

關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主

要包括：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、重復(fù)性、最低檢

測限等。

按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，

申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要

求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，

附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報告

應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品技術(shù)要求，在符合《辦法》要求的醫(yī)療器械

檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)，提供檢驗(yàn)合格

報告。

（十）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、樣本采集及處理、檢驗(yàn)方

法、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)

室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)

解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申

報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷

試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局

通告2014年第17號）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說

明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致

性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)

技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究

結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格

式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，肺

炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下

內(nèi)容。

1．【預(yù)期用途】

1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清/血漿/全血樣本中

的肺炎支原體IgM/IgG抗體。

1.2結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，用于肺炎支原體感染

的輔助診斷。

1.3臨床背景描述：簡單介紹病原體的生物學(xué)特征、流行

病學(xué)、潛伏期、易感人、感染后的臨床表現(xiàn)及相關(guān)疾病等。

簡要介紹現(xiàn)有的肺炎支原體臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

2.1樣本采集前的要求：如采集時間、采集順序、采集量

等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

2.2樣本采集：說明采集方法及樣本類型，對于血漿、全

血樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

2.3干擾物的影響：明確常見干擾物對實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否產(chǎn)

生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

2.4樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、

冷凍等）及不同保存條件下的保存時限和運(yùn)輸條件等。冷藏、

冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限

制等。

3.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個步驟：

3.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

3.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

3.3高濃度樣本稀釋的方法。

3.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長等。

3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性

的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

3.6對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢

驗(yàn)操作方法、程序等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、

讀取結(jié)果的時間。

3.7特別說明檢驗(yàn)操作過程中的注意事項(xiàng)。

4.【陽性判斷值】說明陽性判斷值，并簡要說明陽性判斷

值確定的試驗(yàn)方法。如陽性判斷值（CO值）需進(jìn)行計算確

定，詳細(xì)描述具體計算方法。

5.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品以及樣本的檢測結(jié)果，對所

有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。對于膠體金

法檢測試劑可采用圖示形式顯示檢測結(jié)果。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療指

南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指

南的要求。如有灰區(qū)判定，詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方法。

6.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍

等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，建議包括以下

內(nèi)容：

6.1本試劑盒的檢測結(jié)果不得作為臨床診治的唯一依據(jù)，

對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀、體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室

檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

6.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、處理及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作

和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

6.3感染初期，抗體可能未產(chǎn)生或者產(chǎn)生水平低于產(chǎn)品

最低檢測限，而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。檢測陰性不能排除急性感

染，對于可疑的樣本建議進(jìn)行病原學(xué)檢測，或至少間隔7天

再次檢測。

6.4評價血清學(xué)檢測結(jié)果時需要結(jié)合患者的臨床病程、

基礎(chǔ)狀況以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下、缺

陷的人、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生

低滴度的抗體，其血清學(xué)抗體檢測的參考價值有限。

6.5在近幾個月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人

，對其陽性檢測結(jié)果的分析應(yīng)慎重。

6.6肺炎支原體抗體在部分治愈患者體內(nèi)持續(xù)存在，短

期內(nèi)再次感染的患者確診應(yīng)進(jìn)行Mp的抗體滴度動態(tài)檢測尤

其是IgM檢測或RNA檢測以進(jìn)行佐證。

7.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：企業(yè)內(nèi)部參考品檢驗(yàn)、陰陽性符合

率、最低檢測限、分析特異性（交叉反應(yīng)和干擾試驗(yàn)）、精密

度、鉤狀（HOOK）效應(yīng)。介紹所用樣本背景信息、數(shù)量、濃

度，評價方法及檢測結(jié)果。

8.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

8.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。

如：試劑盒內(nèi)對照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的

組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人

類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗

體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒

有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為

潛在傳染源對待。

8.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

三、參考文獻(xiàn)

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理總局令第5號），2014年7月30日.

2.《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，（國家食品

藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第16號），2014年9月11

日.

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》，（國家食品藥

品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號），2014年9月11日.

4.國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于公布體外診斷試劑

注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告（國家食品藥

品監(jiān)管總局公告2014年第44號），2014年9月5日.

5.中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會臨床檢驗(yàn)學(xué)組，兒童肺炎支原

體呼吸道感染實(shí)驗(yàn)室診斷中國專家共識，中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，

2019年7月第42卷第7期.

6.中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會，中國獲得性肺炎

診斷和治療指南（2016年版），中華結(jié)核和呼吸雜志，2016

年4月第39卷第4期.

7.陸權(quán),陸敏.肺炎支原體感染的流行病學(xué)[J].中華兒

科雜志,2016,54(3):196-197.

8.中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會感染學(xué)組，肺炎支原體

肺炎診治專家共識，中華結(jié)核和呼吸雜志，2010年9月第33

卷第9期.

四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。