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        不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷含量的分析

        -

        2022年4月17日發(fā)(作者:左旋肉堿的危害)

        第32卷第6期 

        2013年12月 

        doi:10.3969/j.issn.1006—9690.2013.06.012 

        中國野生植物資源 

        Chinese?。住。校欤幔睿簟。遥澹螅铮酰颍悖澹蟆?/p>

        V01.32?。危铮丁?/p>

        Dec.2013 

        不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷含量的分析 

        姚正穎,張衛(wèi)明,孫力軍 

        (南京野生植物綜合利用研究院,江蘇南京210042) 

        摘要 目的:比較分析不同季節(jié)的灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷的含量,為綜合利用莖葉資源提供參考 

        依據(jù)。方法:采用蒸制曬干法對灰氈毛忍冬的莖葉進(jìn)行干燥處理,利用超聲波法提取樣品中的綠原酸和木犀草苷 

        并通過高效液相譜法進(jìn)行含量測定。結(jié)果:綠原酸和木犀草苷含量在不同季節(jié)的灰氈毛忍冬莖葉中差異明顯?!?/p>

        綠原酸含量依次為花>葉>莖,以秋季(11月份)葉片樣品中的綠原酸含量最高(3.031%),是花蕾中含量的96%; 

        木犀草苷含量總體趨勢為葉>花和莖,以冬季(2月份)葉片樣品中的含量最高(0.558%),是花蕾中含量的4.6 

        倍;二者均高于2010版《中國藥典》對山銀花和金銀花指標(biāo)物質(zhì)含量的規(guī)定。結(jié)論:秋冬季節(jié)對灰氈毛忍冬進(jìn)行休 

        眠期整型修剪,副產(chǎn)物葉片資源豐富,藥源成分充足,具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景?!?/p>

        關(guān)鍵詞灰氈毛忍冬;莖葉;綠原酸;木犀草苷;高效液相譜 

        文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1006—9690(2013)06—0035—04 中圖分類號:R284.1 

        Content?。粒睿幔欤螅椋蟆。铮妗。茫瑁欤铮颍铮纾澹睿椋恪。粒悖椋洹。幔睿洹。牵幔欤酰簦澹铮欤椋睢。妫颍铮怼。樱簦澹恚蟆。幔睿洹?/p>

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        Yao?。冢瑁澹睿纾椋睿?,Zhang Weiming,Sun?。蹋椋辏酰睢?/p>

        (Nanjing?。桑睿螅簦椋簦酰簦濉。妫铮颉。茫铮恚穑颍澹瑁澹睿螅椋觯濉。眨簦椋欤椋幔簦椋铮睢。铮妗。祝椋欤洹。校欤幔睿簦?,Nanjing?。玻保埃埃矗?,China) 

        Abstract Objective:To?。悖铮恚穑幔颍濉。簦瑁濉。悖铮睿簦澹睿簟。铮妗。悖瑁欤铮颍铮纾澹睿椋恪。幔悖椋洹。幔睿洹。纾幔欤酰簦澹铮欤椋睢。妫颍铮怼。螅簦澹恚蟆。幔睿洹。欤澹幔觯澹蟆?/p>

        of Lonicera?。恚幔悖颍幔睿簦瑁铮椋洌澹蟆。悖铮欤欤澹悖簦澹洹。椋睢。洌椋妫妫澹颍澹睿簟。螅澹幔螅铮睿螅停澹簦瑁铮洌螅海模澹瑁洌颍幔簦椋睿纭。恚澹簦瑁铮洌蟆。铮妗。螅簦澹幔恚椋睿纾螅酰睢?/p>

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        灰氈毛忍冬(Lonicera?。恚幔悖颍幔睿簦瑁铮椋洌澹蟆。龋幔睿洌弧?/p>

        銀花藥材的主流品種之一 卜 ?;覛置潭鳛橹小?/p>

        Mazz.),忍冬科忍冬屬植物,具有花期長、適應(yīng)性 

        強(qiáng)、易繁殖、易采摘等特點,是我國西南、中南地區(qū)金 

        藥山銀花的主要來源,其花、莖、葉均可入藥,與傳統(tǒng) 

        中藥材金銀花同具清熱解毒、疏散風(fēng)熱之效 ?!?/p>

        收稿日期:2013—05—18 

        資助項目:“十二五”國家科技支撐計劃(2011BAD33B02) 

        通訊作者:孫力軍,博士,副研究員,主要研究方向:生物技術(shù)。E—mail:shengwudiqiu@126.corn 

        一35— 

        中國野生植物資源 第32卷 

        綠原酸和木犀草苷是金銀花的主要有效成分, 

        許多研究報道了其在花、莖、葉等部位的含量 。 

        灰氈毛忍冬與金銀花具有相同的主治與功效,2010 

        版《中國藥典》規(guī)定山銀花的質(zhì)量控制指標(biāo)成分為 

        綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙;金銀花 

        的質(zhì)量控制指標(biāo)成分為綠原酸和木犀草苷。前期研 

        究報道了灰氈毛忍冬干燥花蕾中綠原酸、灰氈毛忍 

        冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙和木犀草苷含量均高于 

        《中國藥典》的規(guī)定?。?。目前對于灰氈毛忍冬有效 

        藥源成分的研究主要集中在其花蕾部分,而對其莖、 

        葉中活性成分的報道較少。 

        每年不同季節(jié)對灰氈毛忍冬進(jìn)行整形修剪產(chǎn)生 

        了大量的莖葉副產(chǎn)品,而且產(chǎn)量遠(yuǎn)高于花蕾 。本 

        研究前期發(fā)現(xiàn)灰氈毛忍冬莖葉中未能檢’?貝4出灰氈毛 

        忍冬皂苷乙和川續(xù)斷皂苷乙。為了合理開發(fā)利用藥 

        用植物資源,擴(kuò)大灰氈毛忍冬的藥用部位,本文采用 

        《中國藥典》所收載的金銀花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下的含量 

        測定方法,分別在不同季節(jié)(夏季、春季、秋季和冬 

        季)采集同株灰氈毛忍冬來源的莖葉,分析其中綠 

        原酸和木犀草苷的含量,探討灰氈毛忍冬莖葉的藥 

        用價值?!?/p>

        1材料 

        1.1 樣品 

        灰氈毛忍冬(Lonicera?。恚幔悖颍幔睿簦瑁铮椋洌澹蟆。龋幔睿洌弧?/p>

        Mazz.)為南京野生植物綜合利用研究院選育品種, 

        該品種花蕾呈含苞未放的棒狀,花冠一直不開裂。 

        分別在2012年6月8日(現(xiàn)蕾后10天)和11月6 

        日以及2013年2月25日和5月3日采集同一健康 

        植株的莖葉樣品(剪取帶葉枝條的1/3)用于研究?!?/p>

        1.2儀器與試劑 

        Agilent?。保玻埃靶透咝б合嘧V儀(HPLC)(美國 

        Agilent公司),配有二極管陣列檢測器(DAD)、四元 

        泵和柱溫箱;EL204電子分析天平(中國梅特勒一托 

        利多公司);KQ5200E型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲 

        儀器有限公司)?!?/p>

        綠原酸(純度>95%,美國Sigma—Aldrich公 

        司);木犀草苷(純度>95%,批號LF2012A0001,南 

        京春秋生物工程有限公司)。HPLC分析用試劑為 

        譜純,包括乙腈(美國Sigma—Aldrich公司)、甲醇 

        和乙酸(美國Tedia公司),超純水為娃哈哈純凈水?!?/p>

        一36— 

        2方法 

        2.1 灰氈毛忍冬的干燥處理 

        將采摘的新鮮莖葉攤在蒸籠內(nèi),厚4~5 cm,以 

        蒸蓋上氣時計時3 min,取出后疏松攤在曬盤內(nèi),置 

        于太陽光下直接曬干?!?/p>

        2.2綠原酸含量的測定 

        2.2.1 譜條件 

        譜柱:Agilent ZORBAX?。牛悖欤椋穑螅濉。兀模隆茫保浮?/p>

        (150?。恚怼粒矗丁。恚?,5 I.Lm);柱溫25℃;流速1.0?。恚獭?/p>

        ?rain~;?。剑常常啊。睿?;流動相:0.4%冰醋酸(A)一乙 

        腈(B),梯度洗脫(0~10?。恚椋睿福福担ァ福担ィ?;10 

        ~12?。颍幔椋睿福担ァ罚保ィ?;12~18?。恚椋?,71%~67% 

        A;18~30?。恚椋?,67%~55%A;30~31?。颍幔椋?,55%~ 

        88.5%A)。進(jìn)樣量10?。?,外標(biāo)法定量。 

        2.2.2溶液的制備 

        對照品:精密稱取綠原酸對照品適量,置棕量 

        瓶中,用50%甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含綠原 

        酸0.50?。恚纭9┰嚻罚喝「稍飿悠芳?xì)粉(過5號篩), 

        精密稱定0.5 g,置50?。恚倘萘科恐校茫担埃ゼ状级ā?/p>

        容至刻度,稱定重量,超聲處理40 min,放冷,再稱定 

        重量,用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,8?。埃埃啊。? 

        min 離心5?。恚椋?,取上清過0.45?。頌V膜,即得?!?/p>

        2.3木犀草苷含量的測定 

        2.3.1 譜條件 

        譜柱:Agilent?。冢希遥拢粒亍。牛悖欤椋穑螅濉。兀模隆茫保浮?/p>

        (150?。恚椋欤臁粒矗丁。恚恚怠。恚?;柱溫25℃;流速1.0?。恚獭?/p>

        ?min~;入=350?。睿?;流動相:0.4%冰醋酸(A)一乙 

        腈(B),梯度洗脫(0~30?。恚椋?,90%~70%A);進(jìn)樣 

        量1O?。蹋鈽?biāo)法定量?!?/p>

        2.3.2溶液的制備 

        對照品:精密稱取木犀草苷對照品適量,置棕 

        量瓶中,用70%乙醇溶解并稀釋制成每1?。恚毯福啊?/p>

        L的溶液。供試品:取干燥樣品細(xì)粉(過5號篩), 

        精密稱定3 g,置5O mL容量瓶中,用70%乙醇定容 

        至刻度,稱定重量,超聲處理1 h,放冷,再稱定重量, 

        用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,8?。埃埃啊。?min 離 

        心5?。恚椋?,取上清過0.45 txL濾膜,即得。 

        3結(jié)果與分析 

        3.1線性關(guān)系的考量 

        精密吸取不同體積的綠原酸和木犀草苷對照品 

        第6期 姚正穎,等:不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷含量的分析 

        溶液進(jìn)樣分析,以峰面積(Y)對各對照品的進(jìn)樣量 

        ( ,?。纾┻M(jìn)行線性回歸,所得兩種成分的線性回歸方 

        程如下: 

        綠原酸:Y1=4 097X1+5.76(R2=0.999?。?,線 

        性范圍:0.25~7.50 g) 

        木犀草苷:y2=1?。玻玻罚担兀玻埃埃担ǎ遥玻剑埃梗梗贰。丁?/p>

        ,線性范圍:0.16~1.60 g) 

        結(jié)果表明各對照品在其相應(yīng)的進(jìn)樣量范圍內(nèi)與 

        峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。綠原酸和木犀草苷的 

        HPLC譜峰分別見圖1a和圖1b?!?/p>

        b 

        2.5 5?。罚怠。保稀。保怠?/p>

        t/min?。簦恚椋睢?/p>

        A 

        B?。?、 0 

        2.5?。怠。罚怠。保稀。保怠。玻啊?/p>

        t/rain t/min 

        a:綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品;b:木犀草苷標(biāo)準(zhǔn)品; 

        A:供試品中的綠原酸;B:供試品中的木犀覃苷 

        圖1綠原酸和木犀草苷的HPLC圖 

        3.2精密度實驗 

        分別吸取綠原酸對照品溶液和木犀草苷對照品 

        溶液,按各自的譜條件測定綠原酸和木犀草苷峰 

        面積的RSD(?。剑担┓謩e為1.02%和1.18%。以上 

        數(shù)據(jù)表明,該實驗精密性良好?!?/p>

        3.3穩(wěn)定性實驗 

        取同一供試品溶液,分別于0、4、6、12、24?。柽M(jìn) 

        樣測定的綠原酸和木犀草苷峰面積的RSD(n=5) 

        分別為1.12%和2.43%,表明供試品溶液中各組分 

        在24?。鑳?nèi)穩(wěn)定?!?/p>

        3.4重復(fù)性實驗 

        分別按照2.2和2.3所述方法配制供試品溶液 

        5份,按照各自的譜條件測定綠原酸和木犀草苷 

        的含量RSD(n=5)分別為2.88%和1.48%,表明 

        本方法有良好的重復(fù)性?!?/p>

        3.5加樣回收率 

        精密稱取一定量已知含量的樣品,分別加入對 

        照品適量,按照上述方法制備供試品溶液,測定各組 

        分含量計算回收率,結(jié)果見表1?!?/p>

        表1綠原酸和木犀草苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=5) 

        3.6樣品的測定 

        采用HPLC檢測綠原酸(圖1A)和木犀草苷(圖 

        1B),各組分均能良好分離。以干燥品來計算各樣品 

        中活性組分的含量(%,g?g?。Y(jié)果如表2所示。前 

        期研究可知經(jīng)蒸制曬干處理的的灰氈毛忍冬花蕾中 

        綠原酸含量為3.156%,木犀草苷含量為0.122%[9j?!?/p>

        將莖葉中測得的綠原酸及木犀草苷含量與同時期花 

        蕾中的含量進(jìn)行比較,結(jié)果如圖2所示。

        ∞ ∞ 

         

        ∞ ∞ 加 

        表2不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和 

        木犀草苷的含量(x±s,//,=3)?。ァ?/p>

        綠原酸含量 木犀草苷含量 

        葉 莖 葉 莖 

        圃綠原酸(葉) 口綠原酸(莖) 

        —書一木犀草苷(葉)—日一木犀草苷(莖) 

        O ∞?。稀∪纭。稀〖印。啊。啊?/p>

        玨 

        趕 

        夏季 秋季 冬季 吞季 

        (6月份)(11月份)(2月份)(5月份) 

        圖2不同季節(jié)灰氈毛忍冬莖葉中綠原酸和木犀草苷的 

        相對含量(%,以夏季花期花營中各物質(zhì)含量為對照) 

        由實驗數(shù)據(jù)可見,綠原酸和木犀草苷在不同季 

        節(jié)的灰氈毛忍冬的花、莖、葉中均有分布,且含量差 

        別明顯。綠原酸含量總體趨勢為:花>葉>莖。秋 

        季(11月份)的葉片樣品含量最高(3.031%),約為 

        同一生長期花蕾綠原酸含量的96%;在夏季(6月 

        份)、冬季(2月份)和春季(5月份)采摘的葉片樣品 

        中,綠原酸含量約為花蕾中含量的54%~70%,;在 

        不同季節(jié)的莖干樣品中,綠原酸含量較低,僅為其在 

        一37一 

        酯 

        0 

        O 

        中國野生植物資源 第32卷 

        花蕾中含量的16%一24%。木犀草苷含量總趨勢 

        為:葉>花和莖(春季除外)。以冬季的葉片樣品含 

        量最高(0.558%),約為同一生長期花蕾中木犀草 

        苷含量的4.6倍;夏季和秋季的葉片樣品中木犀草 

        苷含量分別是花蕾中含量的3.7和3.9倍;春季葉 

        片中含量較低,約為花蕾中含量的82%;在不同季 

        節(jié)的莖干樣品中,除夏季花期樣品中木犀草苷含量 

        約為其在花蕾中含量的2.1倍外,其它三季的木犀 

        草苷含量較低,約為花蕾中含量的24%~70%?!?/p>

        4討論 

        綠原酸是金銀花和山銀花的主要有效成分和活 

        性成分,具有顯著的抗病毒、調(diào)節(jié)糖脂代謝等功 

        能 。依據(jù)2010年版《中國藥典》,山銀花的干燥 

        花蕾中綠原酸含量不低于2.0%_l 。在本研究中, 

        灰氈毛忍冬的夏季和秋季葉片樣品中的綠原酸含量 

        完全符合藥典的規(guī)定,以秋季葉片中綠原酸含量最 

        高(3.031%)。諸多研究報道了金銀花的不同部位 

        均含有綠原酸,按含量依次為花>葉>莖_4?。省1尽?/p>

        研究結(jié)果與金銀花中綠原酸含量分布趨勢一致。而 

        滕昱伯等研究發(fā)現(xiàn)灰氈毛忍冬的主要活性成分綠原 

        酸在各部位含量為花>莖>葉_1 ,這可能與灰氈 

        毛忍冬的產(chǎn)地、品種、采摘季節(jié)及提取工藝等因素存 

        在差異有關(guān)。 

        木犀草苷是金銀花的另一主要特征成分,具有 

        抗菌消炎的功效,藥典規(guī)定其在金銀花干燥花蕾中 

        含量不低于0.05%?。保玻?。由于木犀草苷在灰氈毛忍 

        冬花蕾中的含量過低,關(guān)于其含量檢測的報道較 

        少¨l1H J。我們在前期研究中測得經(jīng)蒸制曬干處理 

        的灰氈毛忍冬干燥花蕾中的木犀草苷含量為 

        0.122%,高于藥典中金銀花項下指標(biāo)的規(guī)定?。埂。?。本 

        研究發(fā)現(xiàn)灰氈毛忍冬莖葉中含有木犀草苷尚屬首次 

        報道。在不同季節(jié)采摘的莖葉樣品中,除冬季的莖 

        干樣品外,其它時期莖葉樣品中木犀草苷含量均高 

        于藥典規(guī)定的下限值。付慶霞報道了木犀草苷在金 

        銀花花期的葉片中含量最高,幾乎是花蕾與莖中含 

        量的3倍 。本研究結(jié)果顯示,夏秋冬三季葉片中 

        的木犀草苷含量遠(yuǎn)高于花和莖,尤以冬季的葉片樣 

        品中含量最高(0.558%),是花蕾中含量的4.6倍?!?/p>

        本研究采用超聲波提取和HPLC,對不同季節(jié) 

        灰氈毛忍冬莖葉樣品中的綠原酸和木犀草苷含量進(jìn) 

        行檢測,方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠。秋季(11月份)采摘 

        的灰氈毛忍冬葉中的綠原酸為3.031%,為同一生 

        長時期花蕾中含量的95%;冬季(2月份)采摘的灰 

        氈毛忍冬葉中的木犀草苷含量為0.558%,是花蕾 

        中含量的4.6倍,二者均高于《中國藥典》的規(guī)定標(biāo) 

        準(zhǔn)。因此,在秋冬季節(jié)對灰氈毛忍冬進(jìn)行整型修剪, 

        葉片等副產(chǎn)物資源豐富,藥源成分充足,灰氈毛忍冬 

        的藥用價值將得以高效開發(fā)利用?!?/p>

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