第１９卷第４期　吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報?。郑铮保保梗危铮础?/p>

２０１０年１２月?。剩铮酰颍睿幔臁。铮妗。剩椋欤椋睢。粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔臁。樱悖椋澹睿悖濉。幔睿洹。裕澹悖瑁睿铮欤铮纾。茫铮欤欤澹纾濉。模澹悖澹恚猓澹?，２０１０　

微粉化技術(shù)對金銀花葉抑菌效果的研究　

李玉杰　，崔貞愛２，王立國２，李玉杰３　

（１．吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，吉林１３２１０１；２．吉林省永吉縣岔路河鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，永吉１３２２１４；　

３．吉林市龍?zhí)秴^(qū)承德街道畜牧獸醫(yī)站，吉林１３２０２２）　

摘要：采用溫水法對不同粒度中藥材金銀花葉進行提取，利用圓形紙片法對７種常見茵進行抗茵試驗。結(jié)果顯示　

隨著粉碎粒度的變細，金銀花葉的抑茵效果明顯提高，即超微粉（１　ｎ）＞１６０目篩細粉＞１２０目篩細粉＞８０目篩細粉＞６０　

目篩細粉。得出微粉化技術(shù)對金銀花葉抑茵效果影響明顯?！?/p>

關(guān)鍵詞：微粉化技術(shù)；金銀花葉；抑茵效果　

中圖分類號：￥５６７　文獻標識碼：Ａ　

Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ?。簦瑁濉。牛妫妫澹悖簦蟆。铮妗。拢幔悖簦澹颍椋铮螅簦幔螅椋蟆。簦铩。龋铮睿澹螅酰悖耄欤濉。蹋澹幔妗。猓。停椋悖颍铮睿椋幔簦椋铮睢。裕澹悖瑁睿铮欤铮纾?/p>

Ｌｌ?。伲酰辏椋澹桑茫眨伞。冢瑁澹睿幔椤?，ＷＡＮＧ?。蹋椋牵酰铮?，Ｌｌ?。伲酰剩椋澹场?/p>

（１．廊　Ｓｆ，ｍ￣ａｎｄ?。裕澹洌恚?，ｏ￣　，砌１３２１０１；２．　Ａｎ／ｒｒ￣?。幔睿洹。郑幔澹颍恚颍。簦В钇觯校颍铮睿澹濉。伲?，￣／　

ＧＴ．ｍｔｙ?。恪。裕恚颍?，?。保常玻玻保矗唬常濉°T上０，?。粒睿耄睿潢懼幔睿洹。郑幔澹颍睿幔颍。铮妗∧摹「∶?，１３２ｍ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ?。椋蟆。簦铩。澹簦颍幔悖簟。洌椋妫妫澹颍澹睿簟。纾颍幔睿酰欤幔颍椋簦。铮妗。簦颍幔洌椋簦椋铮睿幔臁。茫瑁椋睿澹螅濉。恚澹洌椋悖椋睿幔臁。恚幔簦澹颍椋幔欤蟆。龋铮睿澹螅酰悖耄欤濉?/p>

ｌｅａｆ?。簦瑁颍铮酰纾琛。幔洌铮穑簦椋睿纭。祝幔欤欤欤臁。鳎幔簦澹颉。恚澹簦瑁铮洌幔睿洹。簦铩。酰簦椋欤椋濉。幔睿簦椋猓椋铮簦椋恪。簦澹螅簟。簦铩。螅澹觯澹颍臁。悖铮颍颍欤恚铮睢。猓幔悖簦澹颍椋酰怼。簦瑁颍铮酰纾琛。颍铮酰睿洌澹洹?/p>

ｐｆｌｐｅｒ?。洌椋螅搿。恚澹簦瑁铮洌罚瑁濉。颍澹螅酰欤簦蟆。螅瑁铮鳎澹洹。簦瑁幔簟。保保保埃保妫椋睿濉。螅颍恚纭。纾颍幔睿酰欤幔颍椋簦?，ｍ０ｒｅ?。铮猓觯椋铮酰蟆。椋睿悖颍澹幔螅椋睿纭。澹妫妫澹悖簦蟆。铮妗。猓幔悖簦澹?/p>

ｒｉｏｓｔａｓｉｓ　Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ?。欤澹幔?，ｎａｍｅｌｙ?。螅酰猓恚椋澹恚睢。穑铮鳎洌澹颍ǎ保埃穑恚荆保叮啊。恚澹螅琛。螅椋澹觯濉。铮穑鳎洌澹颍荆保玻啊。恚澹螅琛。螅椋澹觯濉。穑铮鳎洌澹颍尽?/p>

８０　ｍｅｓｈ?。螅椋澹觯濉。铮穑鳎洌澹颍荆叮啊。恚澹螅琛。螅椋澹觯濉。铮穑鳎洌澹颍希猓觯椋铮酰蟆。澹妫妫悖澹簦蟆。瑁幔觯濉。猓澹澹睢。纾澹睿澹颍幔簦洌濉。簦铩。瑁簦濉。猓幔悖簦澹颍椋铮螅簦幔螅椋蟆。铮妗。瑁簦濉。瑁铮睿?/p>

ｅｙｓｕｅｋｌｅ?。欤澹幔妗。猓。恚椋悖颍铮睿椋幔簦椋铮睢。簦澹悖瑁睿铮欤铮纾?/p>

Ｋｅｙ?。鳎铮颍洌螅海恚椋悖恚睿椋幔簦椋铮睢。簦悖澹瑁睿铮欤铮纾?；ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　ｌｅａｆ；ｔｈｅ?。澹妫妫悖澹簦蟆。铮妗。猓幔悖簦澹颍椋铮螅簦幔螅椋螅?/p>

金銀花為忍冬科植物忍冬、紅腺忍冬、山銀花　用?！?/p>

或毛花柱忍冬的干燥花蕾或帶初開的花。其主要?。保补┰嚲N　

活性成分是綠原酸金，具有抗菌和增強機體免疫　金黃葡萄球菌、大腸桿菌、表皮葡萄球菌、　

功能的作用…。研究證明金銀花越冬老葉中綠原　

枯草桿菌、青霉、黃曲霉、黑曲霉均由吉林農(nóng)業(yè)科　

酸的含量為金銀花的１．４１倍【２。目前，國內(nèi)報道?。玻呒紝W(xué)院微生物學(xué)教研室保存菌種。　

金銀花葉用乙醇提取、水提取等方法提取后，進行　

１．３試劑　

抑菌試驗?。?，但至今未見采用不同粒度的金銀花　

瓊脂粉和蛋白胨（購自上海匯合生物科技有　

葉提取物抑菌試驗的報道。本研究用溫水法對金　

限公司），牛肉膏（購自上海翔升生物科技有限公　

銀花葉不同粒度進行了提取，并通過抑菌實驗來　

司），化學(xué)試劑等均為分析純?！?/p>

觀察金銀花葉提取物對不同菌種的影響?！?/p>

１．４儀器　

１實驗材料　

萬能粉碎機（ＷＦ）；電熱恒溫干燥箱（２０２一　

１．１金銀花葉　

ｌＡＢ）；高壓滅菌－￣（ＹＸＱ—ＬＳ—ｓｏｓ￣）；行星式球磨　

２００９年ｌ０月采于山東諸城，越冬干燥后備　

機（ＱＭ一１ＳＰ２出料粒度最小可至０．１ｐｍ）；電子天　

收稿日期：２０１０—１０—１８　

基金項目：吉林省教育廳“十一五”科學(xué)技術(shù)研究項目（吉教科合字［２ｏｏ，）３第４９５－８－）　

皇者簡介：李玉杰（１９６６一），女，吉林省輝南縣人，副教授，從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)和動物制藥的教學(xué)和研究?！?/p>

?９?　

第１９卷第４期　吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報?。郑铮?/p>

．１９．Ｎｏ．４　

２０１０年１２月　Ｊｏｕｒｎａｌ?。铮妗。剩椋欤椋睢。粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔臁。樱悖椋澹睿悖濉。幔睿洹。裕澹悖瑁睿铮欤铮纾。茫铮欤欤澹纾濉。模澹沅zｂｅｒ．２０１０　

平（ＡＵＷ２２０Ｄ）；透射電鏡（ＨＩＴＡＣＨＩ　ＴＥＭ?。纫弧?/p>

準確稱取上述制得的五種粉末各５?。?，在水浴鍋　

８１００ＩＶ加速電壓２００ＫＶ）等。　

（８０℃）中熱浸５０ｍｉｎ，然后定容至５０ｍＬ，于容量瓶　

２實驗方法　中過濾，所得濾液即為金銀花葉提取液?！?/p>

２．１培養(yǎng)基的制備?。玻匆志鷮嶒灐?/p>

細菌（ＬＢ）用營養(yǎng)瓊脂［?。荩旱鞍纂耍保啊。?，牛肉膏?。玻矗币志睆降臏y定采用濾紙片法。取直　

３?。纾危幔茫薄。怠。?，瓊脂１５?。纾咸烟牵怠。?，水１?。埃埃啊。桑裕欤?，用　

徑６ｍｍ的濾紙片，分別放入五種提取液中浸泡　

ｈｎｏｌ?Ｌ－１的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ｐＨ：７?。罚怠！?/p>

４ｈ。取出置于真空干燥箱中滅菌干燥。取各種供　

霉菌培養(yǎng)用察氏培養(yǎng)基：ＮａＮ％２　ｇ，Ｋ２Ｉ－ＩＰＯ４?。薄?/p>

試菌懸液各０．２ｍＬ，分別注入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再倒　

ｇ，ＫＣ１?。埃怠。?，ＭｇＳ０４?７Ｈ２０?。埃怠。纾疲澹樱希矗埃希臁。?，蔗糖　

人１５ｍＬ瓊脂培養(yǎng)基，混勻后冷卻成含菌平板。然　

３０ｇ，瓊脂１５ｇ，水１　０００　ｍＬ，ｐＨ值自然?！?/p>

后用無菌鑷子取浸泡過的濾紙片，輕輕貼放含菌　

以上培養(yǎng)基均在１．０５ｋｇ／ｃｍ２（１２１．３℃）滅菌　

平板上，每皿貼２片試驗樣片，１片無菌生理鹽水　

３０ｒａｉｎ。　對照片。置培養(yǎng)箱中３７＇１２培養(yǎng)２４ｈ，霉菌２８℃培　

營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：取蛋白胨、牛肉浸出粉、氯　

養(yǎng)４８ｈ。測定抑菌圈直徑，實驗重復(fù)做３次。　

化鈉、蒸餾水，按《中國藥典》規(guī)定比例混合，微溫　

２．４．２?。停桑眉埃停拢玫臏y定采用微量肉湯稀釋　

溶解后，調(diào)節(jié)ｐＨ為弱堿性，煮沸，濾清，調(diào)節(jié)ｐＨ　

法。ＭＩＣ（Ｍｉｎｉｍａｌ?。桑睿瑁椋猓椋簦铮颍。茫铮睿悖澹睿簦颍幔簦椋铮睿樽钚∫帧?/p>

值，使滅菌后為７．２士０．２，在１１５￣Ｃ滅菌３０?。恚椋睢！?/p>

菌濃度，即藥物（一組是１６０目、１２０目、８０目、６０　

２．２菌懸液的制備　

目金銀花葉細粉水提取物等量混合，為細粉組；另　

將供試菌種在適宜的瓊脂平板上劃線，于　一組為金銀花葉超細微粉水提取物）與一定濃度　

３７℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)４８?。瑁冒捉瓠h(huán)挑起典型菌落　

的菌液作用后，能夠抑制可見菌生長的最低濃度；　

接種營養(yǎng)肉湯管中，在３７￣Ｃ下培養(yǎng)２４?。瑁詿o菌生　

ＭＢＣ（Ｍｉｎｉｍａｌ?。拢幔悖簦澹颍悖椋洌幔臁。茫铮睿悖澹睿簦颍幔簦椋铮睿樽钚⒕?/p>

理鹽水制成含菌數(shù)約為１０７　ｅｆｕ?ｍＬ～，供實驗備　

濃度，即在ＭＩＣ基礎(chǔ)上，從每管吸?。欤希倘芤海c　

用?！?/p>

于固體培養(yǎng)基上，繼續(xù)按ＭＩＣ培養(yǎng)條件培養(yǎng)，以殺　

２．３金銀花葉中抗菌物質(zhì)的提取　

死９９．９％細菌數(shù)量的最低濃度為最小殺菌濃度?！?/p>

２．３．１金銀花葉細粉及超細微粉的制備將干　

采用二被稀釋法將藥液用無菌生理鹽水稀釋系列　

燥金銀花葉用粉碎機粉碎，所得金銀花葉粉先后　

濃度（５．０００％～１００％ｖ／ｖ），在９６孔板上每孔加　

用１６０目．１２０目、８０目、６ｏ目篩細粉留適量備用；　

ｌＯ０￣ｇ不同濃度的藥液和１００／￣Ｌ菌液，使最終菌液　

其余部分再用球磨機進行球磨ｌＯｈ后放入電鏡觀　

濃度為１　５×１７０ｃｆｕ?ｍＬ～，以無菌生理鹽水加菌　

察（金銀花葉超細微粉粒子的大小約為幾百納　

液作為陽性對照，每個實驗重復(fù)３次。　

米）?！?/p>

３實驗結(jié)果　

２．３．２金銀花葉中水溶性抑茵物的提取分別　

３．１抑茵直徑的結(jié)果見表１?！?/p>

表１金銀花葉對７種菌株的抑菌直徑　

由表１可以看出，金銀花葉水提取物對金黃　

曲霉和青霉也有一定的抑制作用；對青霉的抑制　

葡萄球菌（典型的革蘭氏陽性細菌）和大腸桿菌　

作用較弱。金銀花葉不同粒度的水提取物對于各　

（革蘭氏陰性細菌）的抑制作用較強；對黑曲霉、黃　

（下轉(zhuǎn)第４７頁）　

?　１０?　

第１９卷第４期　吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報?。郑铮?１９，Ｎｏ?４　

２０１０年１２月　Ｊｏｕｒｎａｌ?。铮妗。剩椋欤椋睢。粒纾颍椋悖酰欤簦酰颍幔臁。樱悖椋澹睿悖濉。恚椋洹。裕澹悖瑁睿铮欤铮纾。茫铮欤欤澹纾濉。模澹悖澹恚猓澹颍玻埃保啊?/p>

修編中，一定要按照耕地保有量等指標要求，認真　

保護區(qū)內(nèi)的農(nóng)戶發(fā)放《基本農(nóng)田保護責任獎懲　

確定基本農(nóng)田保護區(qū)地塊范圍，在規(guī)劃期內(nèi)除不　

卡》，對依法保護基本農(nóng)田的農(nóng)戶按其所保護的面　

可抗拒因素和國家重大決策外，一律不得調(diào)整基　

積發(fā)放獎金，對沒有履行義務(wù)的農(nóng)戶進行教育，提　

本農(nóng)田規(guī)劃，堅決維護土地利用總體規(guī)劃的嚴肅　

高其保護意識，把基本農(nóng)田保護的責任落實到戶。　

性。第三，健全土地利用總體規(guī)劃的監(jiān)督體系?！?/p>

在把土地利用總體規(guī)劃地塊落實到戶的前提下，　參考文獻：　

蔣亞平．中國土地［Ｍ］．中國國土資源報社出版，２００７：８．　

一是要以行政村為單位制作土地利用在提取規(guī)劃　

［］］

圖公示牌，接受社會的廣泛監(jiān)督；二是建議國家要　

［２］蔣亞平．國土資源通訊［Ｍ］．中國國土資源報社出版，２００７；　

２０．　

在提取的土地出讓金等收益中拿出一定的比例建　

［３］劉黎明．土地資源學(xué)［Ｍ］．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，２００１（１０）：　

立“基本農(nóng)田保護基金”，在鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）土地利用總體?。玻叮保?/p>

規(guī)劃經(jīng)批準后，由鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）政府應(yīng)及時向基本農(nóng)田　

責任編輯：吳艷玲　

、

給　蹄蛉　寫?。骸♂戓憽♂┷恕″础∞恰?、　、　君　分嗡??；　

（上接第１０頁）　

種菌類的抑制作用不同（抑菌環(huán)越大，抑菌效果越　３．２?。停桑眉埃停拢玫慕Y(jié)果見表２?！?/p>

好），超細微粉的抑菌效果最好?！?/p>

表２金銀花葉的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度　

提取物濃度　超細微粉水提取物?。罚恕运堋?/p>

最小抑菌濃度ＭＩＣ　最小殺菌濃度ＭＢＣ　最小抑菌濃度ＭＩＣ　最小殺菌濃度ＭＢＣ　

菌株　

（％ｖ／ｖ）?。ǎィ觯觯。ǎィ觯觯?/p>

（％ｖ／ｖ）　

金黃葡萄球菌?。怠。保稀。保稀。玻啊?/p>

大腸桿菌?。保稀。保啊。玻铩。玻稀?/p>

表皮葡萄球菌?。欤稀。福铩。玻啊。福啊?/p>

枯草桿菌?。保啊。玻啊。玻啊?/p>

４０　

青霉?。矗啊。荆欤埃啊。矗啊。荆保埃啊?/p>

黃曲霉?。玻啊。福稀。矗啊。福稀?/p>

黑曲霉?。玻啊?/p>

８０　

２０　

１ｏ０　

由表２可知，金銀花葉水提取物對金黃葡萄　上有利于藥物有效成分的溶出，增加藥材有效成　

球菌的抗菌活性非常好，兩組的ＭＩＣ分別為５％ｖ／　

分的提取率。但每味中藥微粉化后是否都能達到　

ｖ和１０％ｖ／ｖ，ＭＢＣ分別為１０％和２０％；但對青霉　

上述效果，有待進一步研究。目前，國內(nèi)報道金銀　

的殺菌作用較弱，１００％時兩組均沒有徹底殺滅細　

花葉中綠原酸用乙醇法、水提法等方法提取，本實　

菌；對大腸桿菌、表皮葡萄球菌、枯草桿菌也具有　

驗只采用溫水法對金銀花葉不同粒度提取物的抑　

較強的抗菌活性，ＭＩＣ為１０％ｖ／ｖ或２０％ｖ／ｖ，但　

菌效果，其它溶劑提取物的抑菌效果將繼續(xù)研究?！?/p>

ＭＢＣ值有所不同。通過最小抑菌濃度和最小殺菌　

濃度的測定結(jié)果，超細微粉水提取物的抗菌效果　參考文獻：　

好于細粉。為金銀花葉水提取物用于體內(nèi)實驗濃　［１］王偉．金銀花的化學(xué)成分及藥理作用研究進展［Ｊ］．中華臨　

度的選擇以及治療細菌感染性疾病提供了理論依　

床醫(yī)藥，２００３，４（Ｊ２）：５０～５１．　’　

據(jù)?！?/p>

［２］武雪芬．金銀花越冬老葉有效成分測定［Ｊ］．中藥材，１９９７（１）：　

６～７．　

４小結(jié)與討論　

［３］張寧．金銀花葉的抑菌活性和抗氧化性研究［Ｒ］．香料香精　

微粉化技術(shù)對金銀花葉抑菌效果影響明顯?！』瘖y品，２００８，６（３）：９　１２．　

微粉化技術(shù)是近年興起的應(yīng)用于中藥領(lǐng)域的一項?。郏矗萸澳辏疸y花中綠原酸一步提取法及綠原酸抗菌活性［Ｊ］．　

新技術(shù)，中藥材經(jīng)過超微粉碎后，粒度均勻細密，　

化學(xué)世界。２００５（３）：１６７　１６９．　

并可使細胞壁破碎，增加了藥材的比表面積，理論　

責任編輯：建德鋒　

?４７?