第27卷第6期

2010年12月

阿¨社方學(xué)院學(xué)杯(醫(yī)學(xué)版)

orthUJournal

ofHebeiNniversity(Medical

Edition)

VoL27No．6

Dee．2010

DNA倍體分析在食管良惡性疾病轉(zhuǎn)歸

及預(yù)后研究中的應(yīng)用

逯海綜述孫劍經(jīng)審校

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院消化科，河北張家口075000)

【摘要1DNA非整倍體的出現(xiàn)是惡性腫瘤的特征性標(biāo)志之一。食管上皮細(xì)胞的不典型增生中。DNA異倍體

的出現(xiàn)是惡變的早期信號。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測癌細(xì)胞生物學(xué)特性，是從分子生物學(xué)水平探索腫瘤生物學(xué)特

性及其發(fā)展規(guī)律。測量和分析細(xì)胞核I)NA含量與倍體對惡性腫瘤的病理診斷、惡性程度判定、療效估價(jià)、預(yù)

測預(yù)后具有重要價(jià)值。本文主要綜述了腫瘤細(xì)胞DNA倍體分析及其臨床應(yīng)用的現(xiàn)狀，希望對其應(yīng)用于臨床

以提高對食道良惡性疾病診斷的準(zhǔn)確性和預(yù)測食道癌前病變的發(fā)展轉(zhuǎn)歸起到積極的作用。

【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞術(shù)；DNA倍體分析；食管腫瘤；遺傳異質(zhì)性；預(yù)后

【中圖分類號1R571【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】Cdoi：10．3969／j．issn．1673—1484．2010．06．043

App¨cati∞ofDNA

PloidyAnalysis

inalignantPI嘈I如豳of&ni緲andMDiseaseofEs叩h姆昀I

LUHai．SUN

Jian-jing

ffiliated

Hospital，HebeiNTheFirst

A

orthUniversity，Zhan西iakou，075000，HebeiChina

[ABSTRACrl

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DNA

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for

malignant

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heteropoidappearsatypicalhyperplasia

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cell．Dbeanearlysign

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cellsisthe

investigation

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biologieal

characteristicsandthe

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development。from

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of

Iecular

biology．The

measurementand

analysison

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thenucleusDNAcontentand

heteropid

infleuenceonpatho—

logicdiagnosis，malignantdegreejudgement，curativeeffectassessment。and

predictiveprognosis

for

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orcellDNAanalysisandclinicalapplication

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cancer

malignantdiseasediagnosisaccurately

forecastthe

development

of

esophageal

intramucosal

preeclampsia．

neoplasms，Geneticheterogeneity。

[KEYwomrsl

Prognosis

Flow

cytometry，DNAploidyanalysis。Esophageal

食道疾病在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，其中

食道惡性腫瘤所占比例也逐年增加，食道癌已成為臨

床最常見的惡性腫瘤之一。目前在早期食道癌診斷方

面仍缺乏特異而敏感的檢測手段。很多患者在癌前病

變時(shí)期和食道癌早期由于臨床癥狀不明顯，未能及時(shí)

就診，加上傳統(tǒng)檢查方法的局限性，以至于在發(fā)現(xiàn)惡變

時(shí)已處于中晚期，從而延誤治療。目前迫切需要簡便、

可靠的臨床檢查法，以便能及早發(fā)現(xiàn)病變，并有效地鑒

別其良、惡性。流式細(xì)胞儀(FCM)是檢測DNA倍體

狀況的敏感儀器，隨著FCM在臨床的普及，DNA倍

體分析在腫瘤學(xué)及其他疾病的診斷和預(yù)后判斷中已獲

基金項(xiàng)目：河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號：072761678)

74

得廣泛應(yīng)用[1-z]。測量和分析細(xì)胞核DNA含量與倍

體對食道癌的病理診斷、惡性程度判定、療效估價(jià)、預(yù)

測預(yù)后具有重要價(jià)值。

1基本概念及原理

1．1流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry，

FCM)是利用流式細(xì)胞儀對生物顆粒性物質(zhì)和細(xì)胞的

物理和／或化學(xué)特征性行分析，并對特定的細(xì)胞加以

分選的多參數(shù)計(jì)量技術(shù)口]。通過激光照射快速自動掃

描熒光染的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，顯示被測細(xì)胞的DNA含

量與細(xì)胞周期，借以揭示腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)。用

以分析細(xì)胞大小、細(xì)胞周期、DNA含量、細(xì)胞表面分子

2010年12月逯海等：DNA倍體分析在食管良惡性疾病轉(zhuǎn)歸及預(yù)后研究中的應(yīng)用第6期

以及進(jìn)行細(xì)胞分選等。目前，用流式細(xì)胞術(shù)對惡性腫

瘤組織生物學(xué)特性的研究已形成一個(gè)新的高潮。獲得

了大量有重要學(xué)術(shù)價(jià)值的資料，且已廣泛應(yīng)用于腫瘤

臨床‘}6|。

1．2DNA含量測定正常細(xì)胞有較恒定的DNA含

量，而細(xì)胞癌變過程中結(jié)構(gòu)和／或染體異常是很常見

的。這種變化在流式細(xì)胞儀分析中以DNA倍體指數(shù)

的形式表現(xiàn)出來[7]。正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞都涉及

遺傳物質(zhì)DNA的改變，DNA鏈上基因的排列順序決

定著細(xì)胞的生物學(xué)特，當(dāng)受到致癌因素刺激時(shí)DNA

受到損傷，導(dǎo)致細(xì)胞基因突變與染體畸形或斷裂，使

細(xì)胞在分裂增殖過程中出現(xiàn)DNA含量的丟失、擴(kuò)增

或染體移位、不分離等導(dǎo)致細(xì)胞DNA的質(zhì)和量的

異常，基因排列順序發(fā)生改變，成為DNA含量異常

(增多或減少)的腫瘤細(xì)胞，即DNA非整倍體細(xì)胞，因

此測量和分析細(xì)胞DNA含量與倍體對惡性腫瘤的診

斷具有重要價(jià)值。

2常用術(shù)語及檢測指標(biāo)

2．1常用術(shù)語①DNA指數(shù)(DNAindex，DI)：根據(jù)

1984年國際分析細(xì)胞學(xué)會名詞審定委員會及1990年

第14屆國際分析細(xì)胞學(xué)學(xué)術(shù)會議的決定，以正常組織

內(nèi)二倍體細(xì)胞做內(nèi)標(biāo)，確定樣本細(xì)胞的DI值。②

DNA倍體(DNA

ploidy)分為二倍體(diploidy，D)、近

二倍體(near-diploidy，ND)、四倍體(teteroploidy，T)、

非整倍體(aneuploidy，AN)及多倍體(multiploidy，M)

等5種。樣本細(xì)胞中出現(xiàn)后4種倍體類型之一者，統(tǒng)

稱為DNA異倍體(heteroploidy，H)。③細(xì)胞程序性

死亡水平(apoptosis，Apo)：在DNA直方圖上，在二倍

體G0，。期細(xì)胞峰前出現(xiàn)一個(gè)亞二倍體DNA含量的細(xì)

胞峰為程序性死亡細(xì)胞峰。④細(xì)胞增殖活性：即S期

細(xì)胞比率(S-phasefrae-tion，SPF)，SPF(％)=Is÷

(Go／1+S+G2M)]X100o％C8|。

2．2對樣本進(jìn)行DNA含量分析的主要檢測指標(biāo)及

意義細(xì)胞凋亡水平(apoptosis，Apo)；細(xì)胞增殖周期

分析如S期細(xì)胞比率(S-phasefraction，SPF)、DNA

的(Go／G1)％、(G2+M)％等。Okuyama等認(rèn)為對腫瘤

細(xì)胞DNA含量的檢測，不僅能反映腫瘤細(xì)胞DNA含

量的變化情況，還可以反映細(xì)胞凋亡水平及增殖活性一

即細(xì)胞動力學(xué)變化情況。Ngoi等認(rèn)為，惡性腫瘤的重

要生物學(xué)特性之一是無限制生長，惡性腫瘤細(xì)胞無限制

生長，則SPF明顯增高。Bektas等分析了正常食管黏

膜、增生上皮細(xì)胞和不典型增生細(xì)胞的DNA含量后認(rèn)

為，DNA異倍體可能是癌前病變向食管癌轉(zhuǎn)變的重要

標(biāo)志[1]。Kerr等證實(shí)Apo的變化不僅在腫瘤的發(fā)生、

發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移中有重要意義，而且對腫瘤的診斷、治

療、惡性程度及預(yù)后判斷也有一定的實(shí)用價(jià)值[1]。

3食道良性疾病向食道癌轉(zhuǎn)化的機(jī)制

3．1食管疾病的發(fā)展轉(zhuǎn)化食管良性疾病主要包括

食管炎、胃食管反流病、食管憩室、食管裂孔疝等。其

中反流性食管炎、胃食管反流病的反復(fù)發(fā)作是引起

Barrett食管的主要原因。而Barrett食管是食管腺癌

的癌前病變，是食管良性疾病向惡性轉(zhuǎn)化的過渡階段。

大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為食道癌發(fā)生發(fā)展過程可概括為食道

炎——腸上皮化生(Barrett食管)——異型增生．(上皮

內(nèi)瘤變)一原位癌一浸潤性癌的病理過程．是一個(gè)多階

段循序漸進(jìn)的過程，與Barrett食管、食管鱗狀上皮化

生和不典型增生、幽門螺桿菌、胃食管反流性疾病等因

素密切相關(guān)。

3．2食道癌的分子生物學(xué)機(jī)制環(huán)境、飲食和遺傳等

多因素引起食管癌的發(fā)生，其涉及的分子生物學(xué)基礎(chǔ)

目前認(rèn)為是癌基因激活或抑癌基因失活的基因變化所

致，其發(fā)生發(fā)展過程涉及多種等位基因的獲得或缺失，

抑癌基因甲基化以及許多基因和蛋白表達(dá)的改變。研

究已證實(shí)的有Rb、P。。等抑癌基因失活，以及環(huán)境等多

因素使原癌基因H-ras、C-myc和hsl-1等激活有關(guān)。

食道癌形成與發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制可能與G-S期

調(diào)控因子失常有關(guān)，具體可能是cyclin

D，上調(diào)，Pss、

Rb失活。使細(xì)胞停止DNA損傷修復(fù)，并且不能進(jìn)入

凋亡，加速細(xì)胞周期的進(jìn)行，使細(xì)胞異常擴(kuò)增導(dǎo)致腫瘤

發(fā)生發(fā)展。cyclinD。、P。。和Rb蛋白的檢測對食道癌

預(yù)后、復(fù)發(fā)的估計(jì)有重要參考價(jià)值，并為食管癌的診斷

和治療提供分子生物學(xué)依據(jù)。

3．3Barrett食管的病因Barrett食管是長期胃酸

暴露和胃液返流的并發(fā)癥。反流性食管炎患者中約

10％"--20％發(fā)生Barrett食管[2]。眾多研究表明，Bar-

rett食管是食管不典型增生和腺癌發(fā)生最鶯要的危險(xiǎn)

因素。Cosentino等[9]研究證實(shí)Barrett食管患者患食

管腺癌的危險(xiǎn)性是正常人的30～60倍，Clark等[10j研

究發(fā)現(xiàn)．79％的食管腺癌伴有特殊腸上皮化生，42％伴

有食管一胃結(jié)合部腺癌，5％伴有賁門下腺癌。Camer-

on等[11]發(fā)現(xiàn)食管腺癌中Barrett食管的發(fā)生率為

100％，EGJ腺癌為42％。其他研究者認(rèn)為Barrett食

管患者腺癌發(fā)生率為0．23％"--0．8％[1z-14]。

4在食道癌早期診斷中的應(yīng)用

食道癌的早期診斷具有重要意義。傳統(tǒng)檢查手段

對食道癌的早期診斷陽性率較低，即使在病理形態(tài)上

對可疑癌變的病例作出確診也十分困難．DNA異倍體

細(xì)胞的出現(xiàn)顯示了一個(gè)由量變到質(zhì)變的過程．說明

了已發(fā)生癌變或具有癌變的可能性。檢測食道黏膜癌

前病變和食道癌細(xì)胞核內(nèi)DNA含量，對分析癌前病

75‘

2010年12月河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)第6期

變發(fā)展趨勢，發(fā)現(xiàn)早期食管癌有一定價(jià)值[7]。DNA倍

體與腫瘤的分化、生長方式、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期密

切相關(guān)，且惡性程度高的腫瘤DNA非整倍體檢出率

高【l5I。DNA異倍體出現(xiàn)率越高，癌變的發(fā)生率也越

高，具有異倍體的消化道潰瘍病有癌一樣的侵襲生物

學(xué)特性[16I。

5食管癌DNA倍體的異質(zhì)性研究

人們在利用流體細(xì)胞術(shù)(FCM)對腫瘤細(xì)胞的DNA

DNA倍體值常常存在一定的差異，即整倍體與非整倍

。因此將這種同一組織類型的不同病例或同一腫瘤

的不同組織區(qū)域之間DNA倍體的差異，稱為DNA倍

(PH)[17l。肺癌、腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、腎細(xì)

DNA倍體異質(zhì)性的現(xiàn)

L8]。PH現(xiàn)象發(fā)生的機(jī)制可能是：由于腫瘤的多中

PH發(fā)現(xiàn)PH腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率要

PH腫瘤．PH現(xiàn)象反映腫瘤的惡性度LlJ。

DNA倍體與食管癌預(yù)后的關(guān)系

早期食道癌及時(shí)根治預(yù)后良好．手術(shù)切除5年生

>90％。癥狀出現(xiàn)后未經(jīng)治療的食管癌患者一般

m、已侵犯食管肌層、癌細(xì)胞分化程度差及有局部淋

年制定的食管癌病理分期標(biāo)準(zhǔn)，是確定治療方案

DNA異質(zhì)

NA倍體分析在診斷早期腫瘤中具有明顯優(yōu)越性，所

DNA倍體分析作為生物學(xué)指標(biāo)用于食道癌

Wang。18]等分析了117例食

DNA含量

SPF、淋巴結(jié)和血道轉(zhuǎn)移程度遠(yuǎn)較一些生物標(biāo)

(如PCNA、EGFR、m3等)有臨床意義。DNA倍

1

Kazutoshi等對57例食管鱗狀細(xì)胞癌患者的

44％發(fā)生PH現(xiàn)象．有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者較

PH現(xiàn)象發(fā)生率高，預(yù)后差，提示PH

76

與其預(yù)后相關(guān)[1]。多因素分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤大小、淋巴結(jié)

轉(zhuǎn)移、直接浸潤深度和DNA倍體分析是有顯著意義

的影響預(yù)后因素[19|。重度不典型增生的細(xì)胞增殖活

性明顯高于其他癌前病變．對于形態(tài)學(xué)上診斷為癌前

病變的病例，特別是不典型增生，有必要進(jìn)行DNA含

量、倍體和細(xì)胞增殖活性的多參數(shù)測定，對出現(xiàn)DNA

含量異常、DNA異倍體及細(xì)胞增殖指數(shù)升高的病人，

應(yīng)密切隨訪，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)早期癌變，有助于食道癌的

早期診斷和早期治療L20]。

綜上所述，食道癌已成為嚴(yán)重威脅人類生命健康

的惡性疾病。其早期癥狀不明顯，早期診斷率較低，許

多患者確診時(shí)已發(fā)展到中晚期，生存率低，預(yù)后不良。

食道癌多由食道良性疾病發(fā)展而來，其發(fā)生發(fā)展是個(gè)

漸進(jìn)的過程，對食道良性疾病及癌前病變的早期診斷

和治療是預(yù)防、控制食道癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。傳統(tǒng)檢

查方法對這些疾病的早期診斷存在一定局限性。流式

細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的DNA含量具有很高的靈敏度，在

形態(tài)學(xué)觀察還不能作出明確診斷之前，就可以作出確

切診斷。采用脫落細(xì)胞學(xué)與流式DNA倍體相結(jié)合的

辦法進(jìn)行診斷，陽性率高于單純的細(xì)胞學(xué)檢查。這對

于臨床中減少漏診有重要的參考價(jià)值，有望成為鑒別、

診斷、普查惡性腫瘤的有效方法。通過對DNA含量

和倍體的定量分析，發(fā)現(xiàn)DNA倍體與腫瘤的分化、生

長方式、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期密切相關(guān)，DNA異倍

體可能是癌前病變向食管癌轉(zhuǎn)變的重要標(biāo)志．測量和

分析細(xì)胞核DNA含量與倍體對食道癌的病理診斷、

惡性程度判定、療效估價(jià)、預(yù)測預(yù)后具有重要價(jià)值。希

望對其應(yīng)用于l隘床以提高對食道良惡性疾病診斷的準(zhǔn)

確性和預(yù)測食道癌前病變的發(fā)展轉(zhuǎn)歸起到積極的作用。

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倍體進(jìn)行檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)，在同一腫瘤的不同部位取材所測

體共存的現(xiàn)象，同一瘤體的瘤細(xì)胞具有不同性質(zhì)的細(xì)胞

體異質(zhì)性

胞癌等多種惡性腫瘤都存在

象

心發(fā)生，隨著腫瘤的生長，多個(gè)起源細(xì)胞克隆相互碰撞

形成包括多個(gè)不同倍體類型的腫瘤細(xì)胞亞在內(nèi)的單

個(gè)腫塊，并可能由于基因突變造成起源克隆的遺傳不

穩(wěn)定，從而導(dǎo)致腫瘤在其演進(jìn)過程中失去單克隆而獲

得異質(zhì)性遺傳物質(zhì)，結(jié)果瘤體內(nèi)出現(xiàn)了浸潤性更強(qiáng)、轉(zhuǎn)

移性更強(qiáng)的新的腫瘤細(xì)胞克隆體，因而就會產(chǎn)生對藥

物治療的抵抗性，

高于非

6

存率

在一年內(nèi)死亡。食管癌位于食管上段、病變長度超過

5c

巴結(jié)或器官轉(zhuǎn)移者，預(yù)后不良。目前，我們?nèi)圆捎?/p>

1976

和預(yù)后評估的主要依據(jù)。然而腫瘤細(xì)胞的

性使病理分期標(biāo)準(zhǔn)顯得相對不靈活，而且傳統(tǒng)檢查手

段對食道癌的早期診斷陽性率較低，即使在病理形態(tài)

上對可疑癌變的病例作出確診也十分困難。又由于

D

以目前把

的預(yù)后判斷已成為熱點(diǎn)。

管鱗狀細(xì)胞癌患者的多種預(yù)后因素．指出

的測定、

記物

體異質(zhì)性現(xiàn)象也是提示食管鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后不良的

個(gè)指標(biāo)．

研究發(fā)現(xiàn)．有

無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者

第27卷第6期阿¨弘方學(xué)阮學(xué)亦(醫(yī)學(xué)版)V01．27No．6

2010年12月

Journal0fHebeiNorth

University(Medical

Edition)Dec．2010

中藥多糖的藥理研究進(jìn)展

賀百花吳玉紅

(湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院．湖南衡陽421001)

【關(guān)鍵詞】中草藥；多糖類；藥理作用

【中圍分類號1R961．I【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】Cdol：10．3969／j．issn．1673--1484．2010．06．044

中藥多糖是一類由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接而現(xiàn)補(bǔ)骨脂多糖可作用于IL-2和IFN-y，IL-2能促進(jìn)T

成的天然高分子多聚物，是中藥主要活性成分之一。淋巴細(xì)胞、B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，增加T細(xì)胞、B細(xì)胞對IL-

多糖是所有生命有機(jī)體的重要組成部分，在生物體內(nèi)2的合成和分泌。補(bǔ)骨制脂多糖還可以促進(jìn)細(xì)胞分泌

不僅是作為能量資源和構(gòu)成材料，而且存在于一切細(xì)IFN一7，通過IFN-7發(fā)揮廣泛的免役增強(qiáng)效果。王慧

胞膜結(jié)構(gòu)中，參與細(xì)胞各種生命現(xiàn)象的代謝活動，也是銘[4]等研究發(fā)現(xiàn)，鱉甲多糖能顯著對抗免疫抑制劑引

生物體內(nèi)除核酸和蛋白質(zhì)以外的又一類重要的生物分起的小鼠免疫器官萎縮，對免疫器官具有保護(hù)作用，鱉

子。中藥多糖有很強(qiáng)的生物活性，可調(diào)控細(xì)胞分裂和

甲多糖可改善免疫抑制小鼠的非特異性免疫功能。

分化，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、降血糖、1．2對神經(jīng)系統(tǒng)的作用研究發(fā)現(xiàn)，黃忠仕等研究龍

抗輻射等藥理作用。眼參多糖對快速老化小白鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織單胺類

1中藥多糖的藥理作用神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響，結(jié)果表明龍眼參多糖可有效調(diào)

1．1對免疫系統(tǒng)的作用研究表明胡蘆巴半糖配整中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的合成及提高學(xué)習(xí)記憶能力，

甘露聚糖對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性、人淋巴細(xì)具有良好的抗癡呆作用[s]。汪茜等采用改良的Longa

胞HB4C5增殖和免疫球蛋白M分泌有活化作用[1]。線栓制法制備大鼠中動脈栓塞模型，探討黃芪多糖對

現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)從PanaxquinquefoliusL．根莖中提取的缺血缺氧腦損傷大鼠腦組織中Ca2十和興奮性氨基酸

多糖具有刺激肺巨噬細(xì)胞分泌TNF-a的作用[2]。李

水平的影響，實(shí)驗(yàn)表明黃芪多糖可以降低缺血缺氧損

發(fā)勝r3]等用水提醇沉的方法提取補(bǔ)骨脂多糖，研究發(fā)傷后大鼠腦組織中Ca2+和興奮性氨基酸含量，同時(shí)也

6邵宏濤，孫麗華，谷偉。等．DNA倍體分析在惡性胸腔積液medicaland

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1責(zé)任編輯：寰樸)

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