白細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)法

（一）原理

取稀釋酸溶液，將血液稀釋一定倍數(shù)并破壞紅細(xì)胞，滴入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)一定范

圍內(nèi)白細(xì)胞數(shù)，然后換算成每升血中白細(xì)胞數(shù)。

（二）試劑

白細(xì)胞稀釋液：冰乙酸1.0ml，加蒸餾水至100ml，再加10g/l亞甲藍(lán)（或結(jié)晶

紫）1滴，可使白細(xì)胞略著，用時(shí)便于區(qū)別紅細(xì)胞稀釋液。

（三）器材

1.顯微鏡：普通生物顯微鏡。

2.微量吸管：吸管上刻有10和20ul兩個(gè)刻度（誤差<+-1%）。微量吸管由于生產(chǎn)廠家

不同，質(zhì)量也不相同，但不論哪家產(chǎn)品，在使用前均需經(jīng)嚴(yán)格校正，且應(yīng)做到每位

患者1支。

3.細(xì)胞計(jì)數(shù)板：計(jì)數(shù)板是用優(yōu)質(zhì)厚玻璃制成，每塊計(jì)數(shù)板又分兩個(gè)計(jì)數(shù)池。在計(jì)數(shù)池

兩側(cè)各有一條支柱，與計(jì)數(shù)池高度差是0.1mm。所以將一塊平整的血細(xì)胞計(jì)數(shù)蓋片

放在兩條支柱上時(shí)，蓋片底面與計(jì)數(shù)池之距離為0.1mm。

目前國(guó)內(nèi)通用的是改良Neubauer計(jì)數(shù)板。這類計(jì)數(shù)板中，每個(gè)計(jì)數(shù)池的邊線

長(zhǎng)寬各為3mm，并被精密地刻劃成9個(gè)大方格，每個(gè)大方格長(zhǎng)寬各為1.0mm，其

面積為1m㎡。加蓋玻片后的容積為1m㎡×0.1mm.其中四角上的大方格用單線劃

成16個(gè)中方格，作白細(xì)胞計(jì)數(shù)用；中央1大方格則用雙線劃成25個(gè)小中方格，每

個(gè)小中方格又用單線劃成16個(gè)小格，總計(jì)為400個(gè)小格。大方格每邊長(zhǎng)的誤差是

+-1%；蓋片與計(jì)數(shù)池面之距離誤差為+-2%。

4.白細(xì)胞蓋片：這是特制的血細(xì)胞計(jì)數(shù)用蓋片，要求表面光滑平整，兩面平整度為

0.002mm以內(nèi)，有一定重量，不被血細(xì)胞懸液浮起。其厚度應(yīng)為0.4—0.7mm，通

常大小為24×20×0.6mm。

蓋片是否平整，可用光波干涉現(xiàn)象進(jìn)行鑒定。其方法是：將蓋片擦凈后，平整放在

標(biāo)準(zhǔn)平面平晶上，用日光燈照射，觀察在平面平晶上所見到的干涉條紋，判斷其是

否合格。蓋片在使用前應(yīng)當(dāng)用干凈、柔軟的吸水纖維制品拭凈，特別注意勿讓手接

觸使其污染，否則充液時(shí)易產(chǎn)生氣泡。

（四）操作

1.取小試管（12×75mm）一支，加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。

2.采指血20ul，吸入稀釋液中，混勻。

3.用小滴管或點(diǎn)眼棒取少量混懸液，滴入計(jì)數(shù)池中，靜止2—3min.

4.用低倍鏡計(jì)數(shù)四角大方格的白細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)按一定順序，對(duì)壓線的白細(xì)胞應(yīng)按數(shù)

上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則計(jì)數(shù)。

（五）計(jì)算

白細(xì)胞/L=四大方格白細(xì)胞數(shù)（N）/4×10×106×20

=N×5/100×109

=N/20×109/L

式中：1/4標(biāo)示平均一大方格中白細(xì)胞數(shù)。

×10表示10大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)。

×106表示1升稀釋液中白細(xì)胞數(shù)。

×20為稀釋倍數(shù)。

血小板顯微鏡計(jì)數(shù)

（一）原理

利用能保護(hù)血小板的稀釋液，將血液稀釋一定倍數(shù)，滴入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)一定范圍

內(nèi)血小板數(shù)，即可換算成每升血中血小板數(shù)。

（二）稀釋液

1.草酸銨稀釋液

草酸銨1.0g

EDTA-Na20.012g

蒸餾水加至100.0ml

配好后用數(shù)層濾紙過(guò)濾，清亮后使用。此液對(duì)紅細(xì)胞破壞力較強(qiáng)，血小板形態(tài)清楚。

但只加草酸銨，不加EDTA鹽，則易產(chǎn)生草酸鈣結(jié)晶。

2.許汝和式稀釋液

尿素（AR或GR）10.0g

檸檬酸鈉0.5g

甲醛溶液0.1ml

蒸餾水加至100.0ml

混合后過(guò)濾即可備用。

此稀釋液破壞紅細(xì)胞完全，視野清晰，血小板清楚。但尿素易分解，可因室溫升高

和保存過(guò)久而失效。一般只能使用10d，4攝氏度冰箱中保存，可稍延長(zhǎng)使用期。

一次配量不宜過(guò)多。

歸納血小板稀釋液的成分包括抗凝劑，如檸檬酸鹽、EDTA鹽等；固定防腐劑，如

甲醛等；溶血?jiǎng)?，如尿素、草酸銨等，以及等滲劑等。

一種好的稀釋液應(yīng)具備：（1）能有效地防止血液凝固；（2）迅速固定血小板，防止

其聚集和形態(tài)改變；（3）要求紅細(xì)胞破壞完全；（4）組成簡(jiǎn)單，易保存，不生長(zhǎng)細(xì)菌。

（三）操作

1.取稀釋液0.38ml，采末梢血20ul加入稀釋液中，混勻，靜置10min左右。

2.混勻后取出少許滴入計(jì)數(shù)池，在溫室中靜置10—15min。

3.在顯微鏡下（低倍或高倍）計(jì)數(shù)中央大方格中5個(gè)小中方格（與紅細(xì)胞同）的血小

板數(shù)。

（四）5小中方格血小板數(shù)（N）×5×10×20×106

=N×109/L

（五）注意事項(xiàng)

1.如血小板數(shù)過(guò)低，可計(jì)數(shù)25個(gè)中方格中的血小板數(shù)，結(jié)果×200.

2.凡影響紅白細(xì)胞計(jì)數(shù)的技術(shù)因素都應(yīng)注意。

3.全部器材和稀釋液應(yīng)十分清潔。因?yàn)檠“逍螒B(tài)不規(guī)則且細(xì)小，任何灰塵斑點(diǎn)都可

給計(jì)數(shù)造成困難，甚至誤認(rèn)。

4.刺入皮膚深度要適當(dāng)（2—3mm）,血液應(yīng)自然流出，避免擠壓。動(dòng)作要快，以防止

血小板聚集。

5.如和血常規(guī)一起做，應(yīng)先采血小板計(jì)數(shù)用血。

6.因血小板易聚集，所以滴入計(jì)數(shù)池之前應(yīng)充分混勻，但又不能用力過(guò)度，以防止破

壞血小板。

7.血小板在計(jì)數(shù)池中，完全下沉后方可計(jì)數(shù)。沉積時(shí)間短，結(jié)果偏低。但過(guò)長(zhǎng)，計(jì)數(shù)

池中稀釋液容易蒸發(fā)，尤其是夏季。所以最好將計(jì)數(shù)板放入溫室中。

8.用尿素稀釋液，一般應(yīng)在1h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，計(jì)數(shù)結(jié)果偏低..

（六）質(zhì)量控制

血小板計(jì)數(shù)質(zhì)控較難，但應(yīng)按操作規(guī)程，并認(rèn)真參照注意事項(xiàng)，減少血小板聚集，破

壞，排除干擾，切實(shí)辨認(rèn)血小板形態(tài)，減少誤認(rèn)。此外，還可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)控，即在血片

上觀察血小板與紅細(xì)胞密度比例，估計(jì)血小板數(shù)量。根據(jù)陳緗介紹：梅10個(gè)油鏡視野血小

板之和乘以2000，約為每微升血中血小板數(shù)。