基因運載體有哪些?什么是基因運載體?
想必大家都知道,“基因剪刀”指CRISPR基因編輯技術(shù),用它能像在電腦上編輯文章一樣,精確查找一串代碼在基因組中的位置,進行刪除或修改。那么,你知道什么是基因運載體嗎?
在基因操作過程中使用運載體有兩個目的:
一是用它作為運載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細胞中去;
二是利用它在宿主細胞內(nèi)對目的基因進行大量的復(fù)制(稱為克隆)。
常用的運載體主要有兩類:
一類是細菌細胞質(zhì)的質(zhì)粒,它是一種相對分子質(zhì)量較小、獨立于擬核區(qū)DNA之外的環(huán)狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千堿基對),有的一個細菌中有一個,有的一個細菌中有多個。質(zhì)粒能通過細菌間的接合由一個細菌向另一個細菌轉(zhuǎn)移,可以獨立復(fù)制,也可整合到細菌擬核DNA中,隨著擬核DNA的復(fù)制而復(fù)制。
另一類運載體是噬菌體或某些病毒等。
除以上兩類外,人們還在不斷尋找新的運載體,如葉綠體或線粒體DNA等也有可能成為運載體。
作為運載體必須具有四個條件:
①在受體細胞中能保存下來并能大量復(fù)制;
②有一個至多個限制酶切點,而且每種酶切位點最好只有一個,如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點,可適于多種限制酶切割的DNA插入;
③有一定的標記基因,便于進行篩選。如大腸桿菌的pBR322質(zhì)粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因,就可以作為篩選的標記基因。
④對受體細胞無害。
一般來說,天然運載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據(jù)不同的目的和需要,對運載體進行人工改建?,F(xiàn)今實際所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過改建的。
值得一提的是,運載體(Vector),一是用它作為運載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細胞中去;二是利用它在受體細胞內(nèi)對目的基因進行大量的復(fù)制(稱為克隆)。最終在受體細胞中表達大量目的基因產(chǎn)物,經(jīng)分離純化被人們利用。
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