小鼠酒精性脂肪肝模型的建立

發(fā)表時間：2011-11-23T10:28:36.130Z來源：《中外健康文摘》2011年第30期供稿作者：張勁松1(通訊作者)吳鐵2鄒麗宜2

[導(dǎo)讀]酒精及高脂飲食對對小鼠一般情況及體重的影響每天觀察小鼠的一般癥狀，進(jìn)食變化等。

張勁松1(通訊作者)吳鐵2鄒麗宜2

（1廣東醫(yī)學(xué)院實驗動物中心523808;2廣東醫(yī)學(xué)院藥理教研室523808）

【中圖分類號】R575【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-5085（2011）30-0096-03

【摘要】目的探討建立小鼠酒精性脂肪肝動物模型的方法。方法80只雄性昆明小鼠隨機(jī)分成4組：NS組每天灌胃生理鹽水和普通飼料喂

養(yǎng)，HM組、MM組和LM組采用每天按照-1.d-1對小鼠灌胃濃度為60%（V/V）、30%（V/V）和10%（V/V）的乙醇的方法，連續(xù)6

周，觀察其肝臟病理改變、血液等指標(biāo)的變化。結(jié)果造模6周后，模型組小鼠肝臟重量明顯升高，與正常組比較有顯著性差異；病理表現(xiàn)

為廣泛的脂肪變性，血清甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽固醇(CH)升高，高密度脂蛋白膽

固醇（HDL-C）顯著降低，與正常組比較差異有顯著意義(P<0.05)；透明質(zhì)酸（HA）變化不大（P>0.05）。結(jié)論本造模方法與人類酒精

性脂肪肝病變類似，方法簡單易行，實驗周期短，模型穩(wěn)定可靠。

【關(guān)鍵詞】酒精性脂肪肝動物模型高脂飼料小鼠

Establishmentofalcoholicfattylivermodelwithalcoholandfatemulsioninmice

【Abstract】AIM:TosS:Eightymalemicewere

randomlydividedinto4groupswith20ratspergroup:NSgroup(intragastricinfusionofsaline，5ml/kg，fedwith

commondiet)),hMgroup,mmgroupandLMgroup(intragastricinfusionofalcoholby60%V/V，30%V/Vor10%V/V，5ml/e

hologicoftheliverandthebiochemistryindexofplasmawere

S:G，CH，ALTandASTofhMgroupandLMgroupwerehigherthan

NSgroup(P<0.05).CONCLUTION：Thelerimentis

verysimpleandtheexperimentcycleiortandthe

【Keywords】alcoholicfattyliveranimalmodelmice

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1動物2月齡清潔級昆明種小鼠80只，雄性，體重（22±4）g，由廣東醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供（廣東省動物質(zhì)量合格證編號：

A2010068）。飼養(yǎng)室內(nèi)溫度保持在24℃～26℃，濕度維持在50%～60%，專室飼養(yǎng)，專人負(fù)責(zé)。

1.1.2藥品、儀器與試劑100%分析純乙醇（廣州化學(xué)試劑二廠，批號：2007061201）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT/GPT）測試盒，天

冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）和透明質(zhì)酸（HA）測試盒均購于南京建成生物工程研究所，總膽固醇（TC）試劑盒、高密度脂蛋白膽固

醇（HDL-C）試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒購于北京中生生物技術(shù)股份有限公司，LEICAQWIN圖象（德國萊卡）；UV-3010紫外

分光光度計(日本島津)；梅特勒－托利多AE240電子天平（梅特勒－托利多儀器公司上海分公司）。

1.2方法80只小鼠隨機(jī)分為4組，分別為正常對照組（NS組）、高劑量模型組（HM組）、中劑量模型組（MM組）和低劑量模型組

（LM組），每組20只。所有小鼠均于晚上10點后禁食不禁水，次日NS組每天灌喂生理鹽水，HM組、MM組和LM組分別予60%（V/V）、

30%（V/V）和10%（V/V）乙醇水按照-1.d-1灌胃，每天1次，連續(xù)6周，于第6周末禁食12小時后進(jìn)行取材檢測相應(yīng)的指標(biāo)。

1.3觀察指標(biāo)及測定方法

1.3.1酒精及高脂飲食對對小鼠一般情況及體重的影響每天觀察小鼠的一般癥狀，進(jìn)食變化等。

1.3.2酒精對小鼠血清學(xué)指標(biāo)的影響采用摘眼球取血后，分離血漿檢測TC、TG、HDL-C、BG（血糖）、AST、ALT和透明質(zhì)酸HA

水平。

1.3.3酒精對小鼠肝臟指數(shù)的影響抽血后，剪開右心房，盡量放出余血，迅速取出肝臟，在4℃預(yù)冷的生理鹽水灌洗后，用濾紙吸干

水分，迅速用電子天平稱量肝臟的重量，計算肝臟指數(shù)。

1.3.4酒精對小鼠肝臟形態(tài)組織學(xué)的影響稱重后的肝臟迅速置于冰上，在肝左葉取10mm×10mm大小肝組織行石蠟包埋切片及HE染

作病理檢查，剩余肝組織分別切成小塊，置于-70℃冰箱中待測肝組織MDA含量和CAT與SOD活性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理實驗結(jié)果均以表示，應(yīng)用SPSS11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析，參數(shù)資料采用One-WayANOVA檢驗，非參數(shù)資料采用Ridit

分析。

2結(jié)果

2.1酒精對小鼠一般情況及體重的影響

實驗過程中每天觀察動物的進(jìn)食量和飲水量，每周稱量體重，稱重前禁食10-12小時。由表1可知，前兩周動物的體重沒有明顯的變

化，而實驗4周后，模型組的體重明顯比NS組增加（P<0.05）,但第六周開始，HM組的體重明顯下降。提示酒精可使小鼠的體重明顯增

加。

表1酒精對小鼠體重的影響（x-±s，g）

ComparedwithNS:a:P<0.05。2.2酒精對小鼠血清肝酶和HA的影響

由表2可知，酒精喂養(yǎng)6周后，模型組3組小鼠血清的ALT和AST含量顯著升高，與NS組比較，差異具有非常顯著意義（P<0.01）。4組

小鼠血清的HA含量差異無顯著意義（P>0.05）。

表2酒精對小鼠肝酶和HA的影響（x-±s）

ComparedwithNS:a:P<0.05,b:P<0.01。

2.5酒精對小鼠肝臟形態(tài)組織學(xué)的影響

由表5可知，喂養(yǎng)6周后，與NS組比較，模型組小鼠的肝組織出現(xiàn)了明顯的脂肪變性（P<0.05），各組動物的肝組織改變見附圖。

表6酒精對小鼠肝臟形態(tài)組織學(xué)的影響（x-±s，n=10）

注：組間差異使用Ridit分析。

3討論

本實驗研究證明，酒精灌胃6周后，小鼠血清膽固醇和甘油三酯明顯升高，而高密低脂蛋白膽固醇顯著下降，肝臟的病例組織也顯

示，長期灌胃酒精的小鼠的肝臟發(fā)現(xiàn)明顯的脂肪變，提示酒精長期灌胃可造成小鼠脂肪肝的動物模型。研究表明[1]，進(jìn)入體內(nèi)的酒精90%

在肝臟代謝，它能影響脂肪代謝的各個環(huán)節(jié)，最終導(dǎo)致肝內(nèi)脂肪堆積，進(jìn)入肝細(xì)胞的酒精，在乙醇脫氫酶和微粒體乙醇氧化酶系的作用下

轉(zhuǎn)變?yōu)橐胰?，再轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜?，還原性輔酶Ⅰ(NADH)與反應(yīng)性輔酶Ⅰ(NAD)比值的升高可抑制線粒體三羧酸循環(huán)，使肝內(nèi)脂肪酸代謝發(fā)生障

礙，氧化減弱，使中性脂肪堆積于肝細(xì)胞中。另外，NADH的增多又促進(jìn)脂肪酸的合成，從而使脂肪在肝細(xì)胞中堆積而發(fā)生脂肪變性，最

終導(dǎo)致脂肪肝形成。精有特異性增加膽堿需要量的作用，而膽堿是合成磷脂的原料之一，而磷脂又是合成脂蛋白的重要原料，故磷脂的不

足影響了脂蛋白的合成，從而影響了脂肪從肝中順利運出而形成脂肪肝。大劑量乙醇刺激腎上腺及垂體腎上腺軸，從而增加脂肪組織分解

率，源于此的脂肪酸又被肝臟攝取，使肝內(nèi)甘油三酯合成率增加并堆積，又因極低密度脂蛋白(VLDL)缺乏載脂蛋白使其分泌有障礙，而產(chǎn)

生脂肪肝。

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