維生素D檢測
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檢測項目名稱:25-羥基維生素D2/D3檢測
一、檢測平臺介紹(檢測方法、采樣步驟、檢測試劑、檢測儀器)
1、檢測方法:串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)
VitD(VitaminD),主要由皮膚經(jīng)紫外線照射合成,具有調(diào)節(jié)鈣磷代謝,防治
兒童佝僂病、骨質(zhì)疏松的重大作用。近年來發(fā)現(xiàn)充足的VitD對于心血管、糖尿病、腫瘤、
免疫性疾病起到預(yù)防作用。傳統(tǒng)研究認為,VitD參與調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝,維持骨骼健康。
近年來的研究發(fā)現(xiàn),VitD的作用遠不止維系骨骼健康那么簡單,它具有極廣泛的生理功能,
VitD受體存在于身體的大部分組織中,在許多常見病的發(fā)生發(fā)展中,都可見到VitD的影
子,腫瘤、糖尿病、高血壓、心血管疾病和自身免疫性疾病等多種疾病都與VitD缺乏相關(guān)。
VitD(VitaminD)是一種脂溶性維生素,根據(jù)來源不同可以分為2大類:
?VitD2(麥角鈣化醇),主要來源于植物性食物,自身無法合成。
?VitD3(膽鈣化醇),主要由皮膚經(jīng)紫外線照射合成,少量來源于動物性食物。
無論是VitD2還是VitD3都需要經(jīng)過血液循環(huán)轉(zhuǎn)運至肝臟,在肝酶的作用下首先轉(zhuǎn)
化為25-羥基維生素D(25(OH)VitD),25(OH)VitD再轉(zhuǎn)運到腎臟,經(jīng)過第二次羥化形
成1,25(OH)2VitD,二者均能發(fā)生生物作用。
目前國內(nèi)外血清25OHD的檢測有傳統(tǒng)方法如放射免疫、競爭蛋白結(jié)合法等,也有高效液
相譜、高效液相譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等新興方法。傳統(tǒng)技術(shù)由于方法特異性及抗基質(zhì)干擾能
力較差,且有些方法不能同時準確測定25OHD2和25OHD3的含量,因此無法準確反映出血
清25OHD濃度。串聯(lián)質(zhì)譜法檢測人血清25OHD,能同時準確測定25OHD2和25OHD3的
濃度,且方法特異性好、抗干擾能力強,被公認為是檢測人血清25OHD的金標準。
液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS):兩個或更多的質(zhì)譜連接在一起,稱為串聯(lián)質(zhì)譜。最簡單的串聯(lián)
質(zhì)譜(MS/MS)由兩個質(zhì)譜串聯(lián)而成,其中第一個質(zhì)量分析器(MS1)將離子預(yù)分離或加
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能量修飾,由第二級質(zhì)量分析器(MS2)分析結(jié)果。最常見的串聯(lián)質(zhì)譜為四極桿串聯(lián)質(zhì)
譜。第一級和第四極桿分析器分別為MS1和MS2,第二級四極桿分析器所起作用是將
從MS1得到的各個峰進行轟擊,實現(xiàn)母離子碎裂后進入MS2再行分析。
MS/MS最基本的功能包括能說明MS1中的母離子和MS2中的子離子間的聯(lián)系。根據(jù)
MS1和MS2的掃描模式,如子離子掃描、母離子掃描和中性碎片丟失掃描,可以查明不同
質(zhì)量數(shù)離子間的關(guān)系。
MS/MS在混合物分析中有很多優(yōu)勢。在質(zhì)譜與氣相譜或液相譜聯(lián)用時,即使譜
未能將物質(zhì)完全分離,也可以進行鑒定。MS/MS可從樣品中選擇母離子進行分析,而不受
其他物質(zhì)干擾。
液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)主要用于分析GC-MS/MS不能分析,或熱穩(wěn)定性差,強極
性和高分子量的物質(zhì),如生物樣品(藥物與其代謝產(chǎn)物)和生物大分子(肽、蛋白、核酸和
多糖)。
液相串聯(lián)質(zhì)譜(LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry)被稱為“分
子天平”,它的出現(xiàn)標志了質(zhì)譜技術(shù)在臨床檢驗醫(yī)學工作成功普及的開始,質(zhì)譜技術(shù)已經(jīng)逐
步發(fā)展成為應(yīng)用廣泛的分析手段,具有超敏性、高特異性、高選擇性和快速檢測的優(yōu)點。
2、樣本送檢流程
醫(yī)生開檢驗申請單→護士或檢驗采樣,并登記采樣者、采樣日期、采樣時間等信息→護
士或檢驗將樣本、檢驗申請單、交接單交予艾迪康公司物流→當?shù)匕峡倒疚锪鲗?/p>
本樣本、檢驗申請單、交接單運送至上海艾迪康臨床檢驗中心
3、樣本采集及要求
①靜脈采血3ml,推薦首選普通血清管分離血清、也可使用EDTA抗凝管(紫蓋)分離血
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漿;
②采血后6小時內(nèi)采用離心沉淀法(1300g,10min)分離血清,如果不能立即檢測須將血清
樣本置于2-8度或-20度避光保存;
③樣本運輸上海途中需要4度藍冰運輸;
④患者在進行鈣和維生素D補充前,必須提前進行該項檢測,服藥期間,每1-3月復查一次;
4、流動相及萃取試劑:進口(Sigma/Fluka)試劑,實驗室根據(jù)SOP自配
檢測試劑盒:(上海復星)25羥基維生素D2+D3檢測試劑盒
5、檢測儀器:
①LC-MS/MSAPI3000②WATERS
二、實驗室的質(zhì)量控制
25羥基維生素D2+D3項目作為艾迪康近期新開展的項目。實驗室依據(jù)ISO15189相關(guān)
體系文件配合參考《化學藥物臨床藥代動力學研究技術(shù)指導原則》建立內(nèi)部質(zhì)量控制文件,
從2014年開始,我們選取美國病理學家協(xié)會(CollegeofAmericanPathologists,CAP)
的能力驗證活動ProficiencyTesting,PT也稱為室間質(zhì)評)進行質(zhì)量控制,在內(nèi)部,嚴格按
照SOP針對每次檢測加入3個值(高、中、低)的內(nèi)部質(zhì)控以及一個實驗室盲孔數(shù)據(jù)進行
監(jiān)測。
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